Column chromatography를 위한 Tris-HCl buffer 제조

소개글

생명과학실험 A+ 받을 수 있었던 실험 레포트입니다. 2012년도 작성이지만, 지금 생명과학 과정과 다르지 않습니다. 정성들여 쓴 만큼 도움될 겁니다.
1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO₄Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만든다.

목차

없음

본문내용

1. 실험날짜 : 2012. 03. 15
2. 주 제 : 1M Tris-HCl pH7.4 만들기
3. 목 표 : 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO₄Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만든다.
4. Introduction
※ buffer solution
1) 어떤 용액에 외부에서 어느 정도의 산이나 염기를 가했을 때, 큰 영향을 받지 않고 pH가 크게 변하지 않게 하는 완충작용을 하는 용액이 완충액이다.
일반적으로 약한 산과 그 짝염기의 혼합용액 또는 약한 염기와 그 짝산의 혼합용액이 완충작용을 한다.
예를 들어 아세트산과 아세트산 이온이 같은 농도의 혼합물을 이루면 하나의 완충계가 된다.
실험과정에서는 유지하고자 하는 pH에 가까운 pKa 값을 갖는 buffer 중에서 정제하고자 하는 단백질과 interaction 하지 않는 것을 선택한다. 이때 Henderson-Hasselbalch 식을 사용한다.

<중략>

2) buffer를 선택할 때 고려해야할 특성 :
① pKa Value
② 온도에 따른 pKa (잘 변하지 않아야함)
③ 희석정도에 따른 pKa (잘 변하지 않아야함)
④ 용해도
⑤ 다른 물질과의 반응정도 (metal ions, enzymes) (반응하지 않아야함)
⑥ 가격 (되도록 저렴해야함)
⑦ UV 흡광도 : 단백질과의 overlap (겹치지 않아야함)
⑧ 생체막 투과여부 (막 통과하지 않아야함)

※ Tris
1) Tris는 tris(hydroxymethyl)aminomethane ((HOCH2)3CNH2) 유기화 합물의 약어이고 THAM이라고도 알려져있다. Tris는 biochemistry와 molecular biology에서 광범위하게 사용된다.
biochemistry에서는 TAE, TBE와 같은 buffer solution의 구성성분으로 많이 사용된다.
Tris의 pKa는 8.06이며 Tris buffer는 pH 범위가 7.0~9.2로 효과적인 buffer 능력을 지닌다.

참고 자료

실험print
일반화학 제7판 p710, Zumdahl, 2008/01/10발행, 자유아카데미
레닌저 생화학 상 제4판 p66, 백형환 윤경식 역, 2006/08/20발행, 월드사이언스
일반화학 제7판 p140, Steven S. Zumdahl, 2008/01/10발행, 자유아카데미
네이버백과사전, 위키피디아