[식물생리학] 애기장대

목차

1. Result
2. Discussion

본문내용

Method
A. 생육 조건 및 방법
1. 종자를 소독하여 MS plate에 뿌린 후, 4℃에서 3일 보관.
2. 22℃, 4000Lux의 배양실로 옮겨서 배양.
3. Germination 2주 후 흙으로 옮겨 심는다.

B. RNA 추출
1. Sample을 액체질소 하에서 분쇄
2. RLC buffer 450㎕ 첨가 후 vortex.
3. 56℃ 3min incube.
4. QIA shredder spin column에 옮긴 후 14000rpm 2min centrifuge.
5. New microtube에 collection tube 용액을 옮김.
6. 0.5배 vol. Ethanol(96~100%) 첨가, mix by pipeting
7. RNeasy spin column에 옮겨 14000rpm 15sec centrifuge.
8. Collection tube 용액 버림.
9. RW1 buffer 700㎕ 첨가 후 14000rpm 15sec centrifuge.
10. Collection tube 용액 버림.
11. RPE buffer 500㎕ 첨가 후 14000rpm 15sec centrifuge.
12. Collection tube 용액 버림.
13. RPE buffer 500㎕ 첨가 후, 14000rpm 2min centrifuge.
14. Collection tube 용액 버리고, collection tube 교체 후, 14000rpm 1min centrifuge.
15. 1.5ml tube 에 RNase-free water 30㎕ 첨가 후, 14000rpm 1min centrifuge.

C. cDNA Synthesis
1. Template RNA 0.1~0.5㎍
Primer(oligo dT) 1㎍
DEPC water 12㎍까지 채움
2. 65℃ 5min 처리
3. 5X Reation buffer 4㎍
RiboLock Rnase Inhibitor 1㎍
10mM dNTP Mix 2㎍
Reverse Transcriptase 1㎍
4. vortex & spindown 후 42℃ 60min 처리
5. 70℃ 5min처리

참고 자료

http://arabidopsis.info/StockInfo?NASC_id=N50