PCR (예비+결과)레포트

소개글

PCR 예비레포트+결과레포트 입니다.

목차

1.실험에서 한일
2.실험결과
3.고찰
4.추가아이디어

본문내용

1.실험에서 한일
-genomic DNA추출과 전기영동

2.실험결과

1번은 DNA ladder
2번,3번은 PCR시킨 DNA
4번,5번은 PCR시키지 않은 DNA

3.고찰
-이번실험은 대장균 or genomic DNA를 추출하여 특정유전자를 PCR에 의해 증폭시키고 아가로오스 겔 전기영동법을 이용하여 검출하는 실험이였다.
우리는 genomic DNA대신 대장균의 DNA를 추출하여 실험을 했다.
우리는 겔의 농도를 10%로 했고, 위에 올려져있는 사진의 결과를 보면 1번이라고 써져있는 줄은 ladder줄이고 2,3번줄은 원심분리를 통해 추출해낸 DNA를 PCR해 증폭시킨 DNA들이 들어있는 줄이고, 4,5번은 원심분리를 통해 추출해낸 PCR을 하지 않은 DNA가 들어있는 줄이다.
사진에서도 보다 싶이 DNA ladder은 선명하게 잘 나왔지만 PCR시킨 2,3번의 줄은 나오지 않았으며 오히려 PCR을 하지 않은 4,5번줄이 나오게 되었다.
하지만 4,5번줄도 ladder보다 위에 전개가 되었기 때문에 성공적인 실험이라고 보기 어려웠다. 실험중 여러 가지 문제점이 발생되어 실험결과에 영향을 끼칠수 있는데, 문제가 있을 원인을 생각해 보니
첫 번째, 대장균이 solutionA 용액과 섞는데 몇번의 vortexing을 해도 잘 섞여지지 않았다.
대장균 자체가 용액에 잘 녹아있지 않는 것으로 보였기 때문에 추출이 잘 되지 않았을수도 있다.
하지만 4,5번째 PCR 하지 않은 DNA가 보였기 때문에 추출의 문제라고 보기는 조금 어려웠다. 두번째 이유는 아마 원심분리 때문이지 않을까 싶다.
원심분리의 속도는 거의 6000g~13000g 으로 실험해야하는데 우리가 사용한 기계는 max가 1350rpm으로 원심분리를 했다.
그래서 속도가 원심분리 해야되는 속도보다 낮아서 원심분리가 잘 안되었을 수도 있고 원심분리를 여러번 실행했는데 column을 교체하는 과정에서 DNA에 오염이 되었을 가능성도 있다. 세 번째는 PCR의 문제인데, PCR을 시키지 않은 DNA의 결과가 보여졌으므로 아마 이 과정에서 큰 오류가 생겼을 가능성이 컸다.

참고 자료

없음