생화학실험 4.면역발색법(Western blot)

목차

1. 실험목적
2. 실험결과
3. 토의
4. 참고문헌

본문내용

2) Transfer를 한 후 transfer가 잘 되었는지 확인 할 수 있는 방법에 대해 서술하시오.
- 미리 넣어준 prestained marker가 막으로 이동되었는지 확인한다.
- 막으로 이동된 단백질을 Fast Green, india ink, Ponceau S, amido black 등을 사용해 염색해본다.1)
- 막에 고정된 단백질들에 항체를 결합하여 직접 검출을 해본다. 1)
- 이차항체인 단백질과 결합한 항체의 항체를 이용하여 간접 검출을 해본다. 1)

3) 면역발색 결과, 여러 band가 나왔다. 우리가 검출하기 위해 사용했던 항체가 인식하는 단백질과 다른 크기의 band는 어떻게 설명할 수 있을까? 또, 이것을 줄일 수 있는 방법에 대해 설명하시오.
- 완전히 순수한 antibody가 아니기 때문에 creatine kinase에 가장 많이 붙긴 하지만, creaine kinase 뿐만 아니라 다른 protein과도 결합 하는 것이다. 이것을 줄이기 위해서는 불순물이 없고 creatine kinase에만 붙는 순수한 antibody가 필요하다.

참고 자료

Biochemical Methods, A. Pingoud • C. Urbanke • J. Hoggett • A. Jeltsch, 2003, p.129~130, 234
생화학(상), Jeremy M. Berg • John L. Tymoczko • Lubert Stryer, 2003, p.103
Modern Experimental BIOCHEMISTRY, Rodney Boyer, 2000, p.332~325
DEVELOPMENTAL BIOLOGY, 1988, Scott F. Gilbert, p.204~205