PCR for Species Identification (종 동정)

목차

I. Result
II. Discussion

본문내용

I. Result
N(Negative control)은 band가 없으므로 다른 DNA가 contamination 되지 않았단 것을 알 수 있다. 또한 이 실험에서는 우리가 증폭시킨 DNA이외의 band가 관찰 되지 않아서 잘 실험이 이루어졌다고 할 수 있다.

II. Discussion

캐리 멀리스에 의하여 1985년에 개발된 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR)은 현재 유전물질을 조작하여 실험하는 거의 모든 과정에 사용하고 있는 검사법으로, 검출을 원하는 특정 표적 유전물질을 증폭하는 방법이다. 소량의 유전물질로부터 많은 양으로 증폭할 수 있으므로, 여러 종류의 유전질환을 진단하는 데 사용된다. 또한 세균이나 바이러스, 진균의 DNA에 적용하여 감염성 질환의 진단 등에 사용할 수 있다.
PCR은 3단계로 이루어진다. 열을 이용하여 두 가닥의 DNA를 분리하는 열변성 과정(denaturation)을 거친 후, 온도를 낮추어 primer가 증폭을 원하는 서열 말단에 결합(annealing)하게 하고, 다시 열을 약간 올려서 DNA를 합성하는 중합 반응(polymerization or extension)을 일으킨다. 그 후 다시 세 과정을 n회를 반복하면 이론상으로 2의 n승배의 유전자가 증폭된다.
중합효소 연쇄 반응을 위하여 필요한 물질은 증폭하고자 하는 주형이 되는 DNA, primer, DNA 중합효소, dNTP, buffer, 염화마그네슘(MgCl2)이다.
Primer는 universal primer와 specific primer가 있다. 우리가 사용한 것은 일반적으로 포유류에서 모든 동물의 cytochrome 증폭이 가능한 universal primer인 L14724와 H15915였다. 참고로, specific primer는 특정종의 특정 부분에만 쓸 수 있다.
PCR buffer는 사용되는 중합효소들이 제 기능을 발휘하기 위해 필요하다. 반응 buffer 안에는 pH 안정화를 위한 요소, 보조인자로써의 금속이온, 중합효소의 변성을 막기 위한 안정화 요소가 포함되어있다.

참고 자료

Bartlett, J. M. S.; Stirling, D. (2003). "A Short History of the Polymerase Chain Reaction". PCR Protocols 226. pp3–6
Pavlov, A. R.; Pavlova, N. V.; Kozyavkin, S. A.; Slesarev, A. I. (2004). "Recent developments in the optimization of thermostable DNA polymerases for efficient applications". Trends in Biotechnology 22 (5): pp 253–260