RNA extration[실험보고서 결과사진포함]

목차

1. 실험소개 & 목적
2. 실험방법
3. 실험결과
4. 고찰

본문내용

실험목적: RT-PCR를 이용하여 human cell의 특정한 mRNA의 발현(전사량, 염기서열)을 조사해 봄으로써 역전사 효소의 원리와 RNA 추출 시 사용하는 trizol의 사용방법 및 원리를 알아본다.유전자 발현 양상의 분석연구를 위해서는 환경 변화 또는 특정 조건에 따라 세포 내 그 양이 달라지는 RNA를 target으로 한다. 하지만 단일가닥의 RNA는 이중가닥의 DNA 보다 불안정한 물질이고또한 시험관(in vitro)에서 RNA 자체를 증폭하여 사용 할 수 없기 때문에 보다 안정적인 DNA로 역 전환 하는 과정이 필요한데 이를 역전사(Reverse transcription, RT)라고 한다. 역전사를 통해 만들어진 DNA를 cDNA라 부르고 그 cDNA를 template로 PCR 하는 것이 RT-PCR이다.역전사에 사용되는 RTase는 HIV(Human Immunodeficiency virus)와 같은 RNA virus에서 유래되었는데 RNA를 유전체로 갖는 이들은 증식을 할 때 역전사를 통해 감염체의 세포로 전이 되야 하기 때문에 역전사 효소인 RTase가 잘 발달 되어있다. 실험에 많이 이용되고 있는 역전사 효소는 AMV(Avian Myeroblastosis virus)와 M-MLV(Moloney Murine Leukemia virus)의 두 종의 RTase를 사용한다. 일반적인 AMV RTase는 M-MLV RTase보다 비교적 높은 온도에서 활성을 나타내지만 강력한 RNase H의 활성을 갖고 있어 합성 진행도(Processivity)가 떨어지는 것이 특징이다.* Trizol: acid phenol과 같은 기능을 한다. RNA 만 뽑아내기위해는 세포에 있는 DNA와 protein을 분리해주어야 한다.그러므로 monophasic phenol(cell을 깬후 DNA 3차구조 파괴)과 guanidiniumthiocyanate(protein denaturation, rRNA를 ribosomal protein으로부터 분리)가 있다.

참고 자료

없음