생화학실험 다섯번째. RNA추출

목차

1. 실험일자
2. 실험제목
3. 실험목적
4. 실험원리
5. 실험재료
6. 실험과정
7. 실험결과
8.고찰
9. Question& Answer

본문내용

일반적인 mammalian cell 하나에는 약 10^(-5) ug 정도의 RNA가 존재한다. 이중 80~85%정도를 ribosomal RNA(rRNA)가 차지하고 있고, 나머지의 대부분은 분자량이 작은 transfer RNA(tRNA)나 small nuclear RNA(snRNA)가 차지한다. 이런 RNA들은 제가기 정해진 크기와 일정한 염기배열 순서로 되어있으며 electrophoresis나 밀도 구배 원심 분리 혹은 ion exchange chromatography 등의 방법으로 순수분리할 수 있다. 이와는 대조적으로, 실험실에서 대부분의 연구가 집중되고 있는 mRNA는 세포가 가지고 있는 전체 RNA의 1%내지 5% 밖에 되지 않는다. 이러한 mRNA들은 수백base에서 수천 kilobase에 이르기까지 크기가 다양하지만, 대부분은 3'-end가 poly-adenylation되어 있으므로 이러한 특징을 이용하여 세포내의 mRNA를 특이적으로 분리할 수 있다.
RNA는 ribose를 단위로 해서 이루어지는 물질이고, ribose는 2'-end와 3'-end가 hydroxyl group으로 이루어져 있으므로 DNA에 비해 반응성이 높다. 그리고 이러한 RNA는 phosphate와 ribose 사이의 diester bond를 가수분해시키는 효소인 RNase에 의해 쉽게 분해된다. RNase는 인체의 피부와 타액에 많이 존재하며 cell을 lysis하는 과정에서도 RNase가 많이 분비되기 때문에 RNase로부터 DNA를 보호하는 과정이 중요하다.
RNase는 구조적으로 interchain disulfide bond들이 많이 존재하므로, RNase를 높은 온도로 denature시킬 경우 상온으로 돌아오면 쉽게 renature된다. 또한 DNase와 달리 coenzyme으로써 divalent cation이 필요하지 않기 때문에 EDTA와 같은 킬레이팅 요소로 RNase를 inactivation시킬 수 없다. 따라서 RNase로 인한 문제를 막기 위해선 실험의 초기부터 RNase에 의해 contamination되지 않도록 조심해야 한다.

참고 자료

없음