Bradford&spectrophotometer

목차

1. 목적
2. 원리
3. 기구 및 시약
4.방법
5.결과
6.고찰

본문내용

1. 목적
수용액에 녹아있는 단백질의 양을 Bradford 방법으로 정량한다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준곡선의 작성과 EGFP의 농도를 습득한다. 또한 UV-vis 분광광도계는 나의 단백질이 어떤 파장에서 가장 높은 흡광도를 갖는지 확인하고 bradford로 젤수 있으며 unknown sample에 사용하여 어떤 물질일지를 추측할수 있다

2. 원리
1.Bradford 방법
이 실험에서 사용하는 단백질 정량법은 Bradford방법이다. Bradford 방법은 Coomassie Brilland Blue G-250라는 dye가 페닐기와 술폰산기를 통해 단백질과 결합할 때 최대 흡 광도가 465nm에서 595nm로 이동하며 이 때 595nm에서 최대흡광을 하면 푸른색을 띈 다는것을 이용한 정량법이다. 단백질 표준용액으로부터 표준곡선을 작성하고, 이를 통해 단백질의 농도를 알 수 있다. Bradford 방법은 발색반응이 완료되어 정량하는 데 걸리는 시간이 짧으며 발색이 1시간정도까지 유지될 수 있다. 또한 다른 분석법에 비해 감도가 높고 방해물질이 거의 없어서 쉽게 단백질을 정량할 수 있다. 하지만 단백질마다 dye가 결합되는 정도가 조금씩 다를 수 있고, 석영큐벳은 반응할 수 있으므로 유리나 플라스틱 으로 만들어진 cuvette를 사용해야한다. 단백질 종류에 따라 표준곡선이 달라질 수 있어 표준단백질을 선택할 때 주의해야한다.

2.분광광도기(Spectrophotometer)
분광광도기는 특정 파장의 빛이 화학물질에 의해 흡수되는 정도, 즉 흡광도(absorbance) 를 측정하는 측정기이다. 일반적으로 빛이 물체에 닿으면 물체 표면이나 그보다 조금 내 부로 들어간 후 반사된다. 또 빛은 물체에 흡수될 수도 있고 물체를 통과할 수도 있다. 이 때 흡수되는 빛이 그 농도에 따라 다르기 때문에 이러한 빛의 흡수현상을 이용하여 시료용액 중 빛을 흡수하는 물질의 양을 정량하는 것이다.

참고 자료

http://blog.naver.com/angeliss1?Redirect=Log&logNo=80049257594