PCR

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험결과 및 고찰

본문내용

• 손을 소독할 때 사용하는 것 : 물에 희석한 에탄올•
• Master mix 2x(Hot start)
- DNA polymerase : 74℃에서 최적 반응을 하고 성분 DNA끼리의 합성을 도와줌
- DNTP(deoxynucleotide triphosphate) : DNA 염기서열에 필요한 ATCG를 제공
- Reaction buffer Loading dye : DNA 용액을 무겁게 하여 well로 가라앉히는 역할 / DNA 전기연동의 정도를 알 수있게 해주는 역할
• Forward & Reverse primer : 특정 DNA 증폭의 시발점을 미리 만들어 준다.
• DNA template : 추출된 sample
• Nuclease(free water)

<중 략>

1. 0.5g의 agarose powder를 50mL 증류수에 넣고 녹인다
2. 녹인 agarose gel(물에넣은 agarose powder)를 전자레인지에 아주 작은 입자가 없어지게 완전히 녹인다.
3. 0.25μL 브롬화에티듐(발암물질이므로 주의)을 넣는다
4. 카세인으로 만든 상자에 agarose gel을 담는다. 이 때 거품이 생기지 않도록 조심해서 담는다.
5. Comb를 조심히 넣는다
6. 굳을 때 까지 30분~1시간 정도 기다린다. 이 때 너무 굳거나 너무 덜 굳으면 안된다.
7. 조심스럽게 agarose gel에서 Comb를 제거한다.
8. 카세인 상자를 제거하고 agarose gel을 전기 영동장치에 넣는다
9. 전기영동장치를 작동시킨 뒤, TBE buffer를 표시된 위치까지 붓는다.
10. pipet을 이용하여 well(Comb 넣은 후 생긴 구멍)에 넣는다. 양 쪽 끝에는 DNA ladder 5μL를 남은 well에는 12.5μL를 넣는다.

참고 자료

없음