DNA 증폭 실험 (Amplification of plasmid DNA) 결과레포트

소개글

DNA 증폭 실험 (Amplification of plasmid DNA)에 대한 결과레포트로
Competent cell, 3 important points of vector,
암피실린 (Ampicilin), 카나마이신 (kanamycin),
α complementation 개념에 관한 설명이 포함되어 있으며,

(1) Background, introduction
(2) Materials & Methods
(3) Results
(4) Discussion
(5) Reference

의 구조로 이루어진 표지포함 9페이지짜리 실험 결과레포트입니다.

목차

(1) Background, introduction
(2) Materials & Methods
(3) Results
(4) Discussion
(5) Reference

본문내용

E.coli를 포함한 대부분의 박테리아는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 받아들인다. 이러한 종류를 효과적으로 transformation 하기 위하여 박테리아는 DNA를 받아 들이는 능력을 향상시키는 물리적, 화학적 형태의 처리가 필요하다. 정상적인 bacteria cell의 작용 mechanism은 아직 자세히 알려진 바 없지만, competent cell을 water bath에 42℃로 70~90초 정도 넣어두면 cell wall이 느슨해진 상태로 되어 그 사이에 삽입하고자 하는 gene을 포함한 벡터가 들어가고, 바로 얼음에 다시 넣을 때 cell wall이 수축하는 방식으로 이루어진다. 위에서 말한 heat shock 외에도 전기 충격을 이용하여 vector를 삽입시키기도 한다.

<중 략>

▶Materials:
Plasmid DNA 1λ, Competent cell 20λ, ice, icing bowl, heat block, timer, LB 배양액 500λ, water bath, 항생제 내성 유전자, 항생제 배지(LB plate), 20피펫, 100피펫, 1000피펫, roller, 네임펜, 도포용 플라스틱 밀대
▶Methods:
1. 항생제 내성 유전자가 담긴 plasmid DNA 1λ와 Competent cell 20λ를 10분 icing한 후 42℃ heat block에 45초동안 넣어둔다.

<중 략>

위의 results의 사진과 표를 통해서도 알 수 있듯이 암피실린 항생제가 있는 배지에서는 세포가 증폭되지 못하고 카나마이신 항생제가 있는 배지에서는 잘 증폭된다. 따라서 우리가 삽입한 플라스미드에는 암피실린 항생제 내성 유전자는 존재하지 않으며, 카나마이신 항생제 내성 유전자가 존재함을 알 수 있다.

참고 자료

Je Won Park.., (2011), Discovery of parallel pathways of kanamycin biosynthesis allows antibiotic manipulation, Nature Chemical Biology, 843–852
유전단백체 기능제어 연구센터 http://www.genehunters.co.kr/Training/01_2_2.htm
http://www.phschool.com/science/biology_place/labbench/lab6/competen.html
Bundgaard, H., J. Pharm. Pharmac., 26, 385-392 (1974). "Spectrophotometric determination of ampicillin sodium..."
Bric : http://bric.postech.ac.kr/myboard/read.php?id=29787&Board=tr_interview
http://utminers.utep.edu/rwebb/html/alpha_complementation.html