ligation, transformation

목차

1. 실험목적
2. 실험이론
3. 실험기구 및 시약
4. 실험방법
5. 참고사항
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
- Ligation에 관련된 화학 반응을 이해하고 T-vector와 PCR product의 ligation 원리를 이해한다.
- 재조합된 DNA를 competent cell에 삽입하여 형질전환 후, ampicillin과 x-gal이 들어 있는 LB plate에서 배양하여 colony를 형성시킨 후, 색깔로 재조합 DNA를 판별한다.
- 형질전환 기술을 익힌다.

<중 략>

외부 DNA를 숙주 세포 내에 넣어 주어 세포가 원래의 성질과 다른 새로운 유전 형질을 추가로 얻는 것이다.
E.coli는 linear 또는 circular DNA를 받아들일 수 있는데, 이러한 과정을 'transformation'이라 하며 다음과 같은 단계를 거쳐 이루어진다. E.coli cell이 DNA를 uptake 할 수 있는 상태(competent)로 만들어 주기위해 E.coli cell을 Ca과 같은 multivalent ion의 존재 하에 0℃에서 incubation한다. 이때, cation은 E.coli cell membrane에 존재하는 lipid의 negatively charged phosphate와 complex를 이룰 것으로 추정된다.

<중 략>

① 아래 나와 있는 조성과 같이 중량을 달아 내용물 부피의 4~5배 큰 용기에 담는다. (LB Medium25g/L,Agar15g/L, Deionized water1L* 액체 LB배지를 만들 경우에는 agar를 빼고 나머지는 동일하게 첨가하여 만든다.)
(LB medium 5g, Agar 3g, DW 200mL)
② 뚜껑이 있는 용기일 경우에는 살짝 닫고, 플라스크와 같이 뚜껑이 없는 경우에는 알루미늄 호일로 입구를 막는다.
③ autoclave에 넣고 증기멸균을 시킨다. (120℃, 20min)
④ 뜨겁지 않을 정도로 식으면 ampicillin을 넣는다. 최종 농도는 50㎍/L 가 (200 ㎕/200 mL)되도록 첨가해 주고 잘 섞는다.

참고 자료

http://blog.naver.com/kimgn40?Redirect=Log&logNo=140106308194
http://blog.naver.com/withcoffee67?Redirect=Log&logNo=70160635571
http://blog.naver.com/bsi1223?Redirect=Log&logNo=90097291721
http://arwen.tistory.com/46
http://translate.google.co.kr/translate?hl=ko&sl=en&u=http://en.wikipedia.org/wiki/Ligation&prev=/search%3Fq%3Dligation%26newwindow%3D1%26biw%3D1280%26bih%3D929
http://blog.naver.com/kirokkk123?Redirect=Log&logNo=90191999103
http://blog.naver.com/jin77k?Redirect=Log&logNo=7347652
http://www.spm.genebee.msu.ru/activity/bactcells.html
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=435745&cid=42411&categoryId=42411