화학 전공 실험 SDS PAGE

목차

1.Introduction
2.Chemicals (MSDS) and Apparatus
3.Procedure on manual
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1.Introduction

이번 실험은 SDS-PAGE (SDS PolyAcrylamide Gel Eelctrohporesis)에 대한 실험으로서 저번 실험 까지 분리한 GFP 단백질을 전기영동을 통해 확인하는 것이 목적이다. SDS-PAGE는 단백질을 전기영동을 통해 분석할 때 사용되는 방법이다. 단백질은 DNA와 다르게 복잡한 삼차원 구조를 가지기 때문에 DNA를 확인할 때 사용했던 agarose gel electrophoresis를 이용해서는 복잡한 삼차원 구조의 영향으로 분자량에 따라 단백질을 정확하게 분리할 수 없다. 따라서 gel을 만들 때 계면활성제역할을 하는 SDS (Sodium Dodecyl Sulfate)를 넣어주는데 SDS는 ionic detergent로서 단백질의 아미노산에 결합하여 3차, 4차 접힘 (folding)에 의해 복잡한 구조를 가지고 있던 단백질을 단일 가닥으로 풀어주고 단백질마다의 고유한 전하 차이를 보정해주어 전기영동에서 분자량에 의해서만 분리가 되도록 하는 역할을 한다. Image 1에서 SDS의 구조와 그 역할을 확인할 수 있다.
SDS는 단백질의 크기, 즉 분자량에 비례하여 단백질에 결합하기 때문에 SDS가 결합된 단백질은 분자량에 비례하여 음전하를 띠고 따라서 전기영동 과정에서 단백질들 사이의 고유한 전하 차이에 대한 영향은 보정된다. SDS가 처리가 된 단백질은 음전하를 띠기 때문에 전압 차이 하에서 양극으로 이동하며 일반적으로 단백질의 아미노산 2개 당 하나의 SDS가 결합한다
SDS-PAGE의 gel은 running gel과 stacking gel의 두 부분으로 나누어진다. Stacking gel은 모든 protein들을 빠르게 이동시켜 running gel에서 동일한 출발선에서부터 분리가 시작되도록 하는데 그 원리는 다음과 같다. SDS-PAGE에서 사용되는 1x running buffer에는 아미노산의 종류인 glycine과 Tris-Cl이 포함되어 있다.

참고 자료

http://en.wikipedia.org/wiki/ , www.sciencelab.com/ - 여러 가지 chemical들의 MSDS
화학전공실험 매뉴얼 – Procedure 및 Introduction 참고 자료
http://bitesizebio.com/580/how-sds-page-works/ - Image 1
http://www.msgetzbiotech.net/page.html - Image 2 https://www.nationaldiagnostics.com/electrophoresis/article/polyacrylamide-matrix - Image 3
http://www.mun.ca/biology/scarr/Gr12-22b.html - Image 7