화학 전공 실험 Protein Purification

목차

1.Introduction
2.Chemicals (MSDS) and Apparatus
3.Procedure on manual
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1.Introduction

이번 실험은 GFP expression과 GFP protein의 purification에 관한 실험이다. 앞선 실험에서 GFP DNA를 삽입한 vector plasmid가 transforming된 DH5α 균체 배지에서 배양하였다. 배양된 DH5α colony에서 GFP protein을 발현하게 하고 발현된 protein을 purification하는 것이 이번 실험의 목적이다. 배양된 DH5α colony에서 transformation이 잘 된 colony를 선택하는 것은 배양 과정에서 배지에 ampicillin과 IPTG를 첨가함으로서 알 수 있다. Ampicillin은 항생제로서 vector plasmid에 ampicillin 내성 유전자가 포함되어 있기 때문에 vector plasmid가 transformation이 되지 않은 DH5α cell은 배양과정에서 모두 죽게 된다. Vector plasmid transformation되어 colony를 이룬 cell 집단이라도 insert DNA가 포함되지 않고 self-ligation된 vector plasmid를 가진 colony 일 가능성도 있는데 이는 IPTG를 통해 분리해낼 수 있다. Vector의 multiple cloning site에는 ampicillin 내성유전자 뿐만 아니라 lac Z 유전자가 포함되어 있고 IPTG는 lac Z 유전자에서 lac operon에 붙어 있던 inhibitor와 결합해서 inhibitor를 lac operon에서 분리하는데 inhibitor가 분리된 lac Z 유전자는 β-galactosidase를 합성한다. β-galactosidase는 변형된 galactose의 일종인 X-gal을 분해한다. 분해된 X-gal은 푸른색을 띠게 되어 육안으로 쉽게 구별 가능하다. 즉 X-gal과 IPTG를 colony의 배지에 첨가하면 insert DNA가 transformation 되지 않은 colony는 IPTG에 의해 lac Z 유전자가 활성화되어 β-galactosidase가 합성되고 X-gal을 분해하기 때문에 colony가 푸른색을 띠게 된다. .

참고 자료

http://en.wikipedia.org/wiki/ , www.sciencelab.com/ - 여러 가지 chemical들의 MSDS
화학전공실험 매뉴얼 – Procedure 및 Introduction 참고 자료
http://www.kpl.com/catalog/categories.cfm?Catalog_ID=17&Category_ID=448 - Image1