식물생화학 원심분리

목차

1. 밀도 기울기 원심분리
2. Density Gradients Buffer
3. Sucrose Gradient Buffer
reference

본문내용

밀도 기울기 원심분리에서는 편차원심분리 경우와 다르게 균질 용액 대신에 밀도기울기를 이용한다. 용액의 밀도는 튜브 아래로 내려갈수록 증가하기 때문에 원심분리 중의 대류에 의한 혼합을 방지할 수 있다. 밀도기울기 원심분리에는 속도침강원심분리와 등밀도 원심분리의 두 가지 형태가 있다.

1) 속도침강 원심분리 (rate-zonal centrifugation)
속도침강 원심분리는 밀도기울기(density gradient)를 이용한 방법이다. 이 방법의 이용시에 주의할 점은 시료를 넣을 때 밀도기울기 매질의 가장 윗면으로 매질과 섞이지 않도록 조심하여 주입(loading)해야 한다는 것이다. 또한 원심분리시에도 저속에서 시간을 짧게 실시하여야 하며 그렇지 않으면 모든 입자가 바닥에 가라앉게 된다.

<중 략>

속도침강 원심분리는 크기가 다른 입자가 동시에 침전하는 문제점을 극복할 수 있으므로 크기가 확실한 단백질, RNA, 리보좀 등을 분리할 수 있다. 그러나 세포막 단편, 세포내 소기관 등은 분리하기 힘들다. 또한 밀도기울기 원심분리는 분리하고자 하는 시료의 형태에 따른 입자의 분리에는 적합하지 않다.
등밀도 원심분리는 입자가 등밀도 위치에 존재하기 때문에 고속으로 오랜시간 동안 원심분리하여도 입자에 아무런 영향을 주지 않으며 바닥에 가라앉지도 않는다. 또한 시료를 주입할 때 매질과 섞이어도 분리에는 아무런 영향을 주지 않는다.

<중 략>

buffer를 만들 때는 점차적으로 낮은 밀도의 용액을 넣어 층을 형성시킨다. 따라서, 처음 용액을 넣을 때 35% sucrose buffer를 넣는다. 용액을 만들 때 점차적인 밀도구배를 만들기 위해 Fg.1과 같은 형식을 따르는 것이 추천된다. 만약에 용액이 tip을 따라서 흘려보내지 못하면 작은 양의 기압을 관에 가해주어 흘려준다. 이때 blue tip의 넓은 쪽을 부드럽게 두드려준다.

참고 자료

양봉안전생산 및 품질관리기술개발
한국생화학회/ 실험 생화학/ 탐구당 / p.117-121