Plasmid DNA 분리

소개글

1,2학기 생물학실험 A+ 레포트 입니다.

목차

1.실험목적
2.실험방법
3.실험결과
4.토의

본문내용

이번실험은 1학기 때도 접한 적 있는 DNA Plasmid에 관한 실험이었다.
DNA와 관련된 실험은 항상 생소하고 이론이 어렵기 때문에 보고서를 쓰기전에 이실험과 관련된 정보를 많이 찾아보았다.
일단 Plasmid DNA를 찾아보았고 아래와 같은 정보를 얻을 수 있었다.
Plasmid DNA란?
① 환상형의 이중 가닥 DNA
② 세포내에서 염색에 DNA와는 별개의 존재
③ 자기 스스로 복제 가능
④ 대부분 세균에 존재하나, 일부 진핵세포 생물(예 : 효모)에도 존재
⑤ 1940년대에 알려지기 시작.
⑥ 1970년대 초에 유전공학 도구로 사용되기 시작하여 운반자 DNA로 불려짐

<중 략>

1) 각 단계별로 원인을 찾기 위하여 plasmid DNA 분리용 각 Buffer를 넣는단계에서 일부를 취한후, Agarose gel 전기영동법을 통해 plasmid DNA가 포함되어 있는지 확인
2) Solution 1과 Solution 2를 처리한 후에 Lysate가 투명하게 되지않으면 대장균 세포가 아니고 다른 세균 오염 가능성이 높음
-결과적으로 Plasmid DNA 없음
3) 각 단계별 DNA 확인 방법 및 문제점 해결방안
(1) Solution 1,2 그리고 3를 넣고 원심분리 후, 얻은 cleared lysate
-DNA 확인방법 : 소량 취한후, 그 Volume의 0.7배인 isopropanol을 넣고 원심분리를 통해 DNA 침전후, 녹여 agarose gel에서 plasmid DNA가 있는지 확인
-Cleared lysate에 plasmid DNA가 없는 경우
(A) Plasmid DNA의 propagation이 안된 경우
plasmid DNA를 함유하고 있는 세균의 배양 조건 확인, plasmid DNA분리과정에서 수율과 질은 plasmid DNA의 copy수 Host strain의 종류

참고 자료

없음