Lowry method를 이용한 단백질 정량, 건국대, 생명공학 실험

목차

1. Purpose
2. Principle
3. Apparatus & Reagent
4. Procedure
5. Result
6. Discussion
7. Reference

본문내용

3. Purpose
ⅰ)　단백질을 구성하는 amino acid의 화학적 성질을 이해한다.
ⅱ) Lowry method를 통해 sample에 포함된 단백질을 정량한다.

4. Principle
ⅰ) 자외선 흡수법에 따른 정량
단백질에 포함되어 있는 tryptophan, tyrosine, phenylalanine이 갖는 흡수를 정량하는 방법이다. 이 방법은 간단, 신속하고 낮은 단백질 농도로도 정량할 수 있다. 그러나 단백질의 종류에 따라서 아미노산의 함량이 다른 점과 pH변화에 따라 흡광도가 달라지므로 주의를 요한다. 또한 단백질과 유사한 흡수파장을 나타내는 물질이 혼재하는 경우, 특히 핵산이 혼재하는 시료에서는 핵산 유래의 흡수 영향을 무시할 수 없기 때문에 오차가 발생하므로 주의한다.

ⅱ) Lowry method
단백질 정량에 있어서 Lowry법의 감도는 비교적 넓게 적용되기 때문에 오랫동안 광범위하게 이용되고 있다. 이 방법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 응용한 것이다. 우리 실험에서는 folm-ciocalteu reagent를 이용하여 일반적인 Biuret 반응보다 강한 발색을 시켜 실험을 진행했다. 발색의 정확한 기작은 밝혀지지 않았지만 이온은 방향족 아미노산의 산화를 유도하여 phospomolybdotungstate를 푸른색의 heteropolymolybdnum으로 환원시킨다. 이러한 반응 결과 강한 푸른색을 생성하며 그 강도는 tryptophan과 tyrosine양에 영향을 받는다. 이 방법은 단백질의 농도가 0.01~ 1.0mg/ml의 경우에 측정가능하다.
아래에 제시된 물질이 혼재하여도 정량치에 영향을 주지 않는다. 괄호안은 % 허용농도.

참고 자료

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