toothpick miniprep

목차

I. Introduction
II. Materials
III. Procedure
Ⅳ. Reference

본문내용

I. Introduction

Plasmid DNA를 agar media plate로부터 따낸 colony에서 바로 얻는 방법이다. 즉 따로 culture할 필요 없이 colony로부터 바로 plasmid DNA를 얻어 agarose gel electrophoresis로 size를 확인하거나 PCR, southern blot을 수행할 수 있다.
원리는 High pH에서 anionic detergent인 SDS를 넣어서 cell membrane을 깨어 그 안에 있는 chromosomal DNA와 protein은 denature시키고, plasmid DNA release를 유도하는 것이다 (그림 1 참조).

II. Materials
Antibiotic for plasmid selection
Bromophenol blue solution (0.4% w/v) or Cresol red solution (10 mM)
--> NSS solution에 미리 포함해도 무방
EDTA (0.5 M, pH8.0) (그림 2 참조)
--> 세포를 둘러싸는 전체 structure를 유지하는데 필수적인 magnesium을 제거한다. 또한, DNA를 degrade하는 cellular enzyme을 inhibition한다.
Ethidium bromide (10 mg/ml) or SYBR Gold (그림 3 참조)
NSS solution (fresh)
0.2 N NaOH
-->DNA denature한다. (크기가 작은 supercoiled plasmid DNA는 다시 renature 된다)

참고 자료

Sambrook and Russell, Molecuar cloning 3rd, volume 1: 1.51~1.54