분자유전실험 - Immunoblot(Western blot)

목차

Ⅰ. Abstract

Ⅱ. Introduction
1. Immunoblot(Western blot)

Ⅲ. Material/Methods

Ⅳ. Results
1. Western blot의 결과를 보고 DcHsp17.7의 발현을 비교, 분석하시오.
2. SDS-PAGE와 Western blot의 결과를 비교, 설명하시오.
3. Standard curve 그리기

Ⅴ. Discussion
1. 결과에 대한 고찰(Description)
2. Western blot과 ELISA의 차이점을 비교하시오.
3. 나노입자에 대해서도 독성이 있다고 나오는데, 무엇을 의미하는가?

본문내용

Ⅰ. Abstract
⇨ 우선 이번 실험의 목표는 저번 실험인 SDS-PAGE에서 크기별로 분리해낸 단백질 Sample에서 이제는 Western blot을 통해 스트레스성 물질에 의한 Hsp17.7 단백질의 발현의 정도를 항원-항체반응을 이용해 특이적으로 인식하여 발광정도를 detection 하는 것이다. 그러기 위해서 gel을 membrane에 Transfer하는 과정을 거치기도 하였다.
실험 결과, X-ray film 감광을 통한 band의 두께와 진하기 분석 결과 negative control에서는 DsHsp17.7의 양이 매우 적게 발현되었고 탄소나노튜브 물질 50, 100, 200㎍/ml을 넣은 lane의 경우 점진적으로 많은 양이 발현되었다. 그리고 positive control에서는 가장 두꺼운 band를 통해 가장 많이 발현되었음을 통해 실험이 잘 수행되었음을 보여준다. 한편, marker의 정보를 이용하여 standard curve를 작성한 뒤에 우리가 원하는 단백질 band의 분자량을 식에 대입하여 계산한 결과 약 22.91kDa이 나왔고, 이것은 x-ray film에 감광하여 detection을 한 것으로, 검정색 또는 어두운 남색 계열의 band가 나타나 있다. 또 Western blot과 SDS-PAGE의 결과 비교를 통해 전자의 경우가 단백질의 발현 양 정도를 더 자세히 파악할 수 있음을 알 수 있으며 후자의 경우는 단백질의 분자량 계산에 유용한 것을 알 수 있다.
다음으로 densitometer의 값을 그래프로 나타낸 결과, negative control을 기준으로 탄소나노튜브 물질 농도가 증가할수록 그리고positive control 일수록 band의 감광 정도가 높으며 따라서 Hsp17.7의 발현양이 많다고 볼 수 있다.
결국 이번 실험을 통해서 탄소나노튜브 물질은 Heat 스트레스와 같이 스트레스성 요인으로 작용하여 그 양이 많아질수록, 스트레스로부터 다른 단백질이 변성되는 것을 막기 위하여 Hsp17.7의 발현이 증대되는 것을 확인 할 수 있었다.

참고 자료

없음