분자유전실험 - Hsp17.7 발현

목차

Ⅰ. Abstract

Ⅱ. Introduction
1. 열충격 단백질(heat shock protein)
2. Molecular chaperone

Ⅲ. Material/Methods

Ⅳ. Results
1. 다음 표를 작성하시오.
2. Heat shock 전 (0 min) sample에서 얻은 soluble protein 양을 100%로 하여 50 ℃에서 30min 처리한 후 얻은 soluble protein 양의 %를 구하고, 그래프를 그린다.

Ⅴ. Discussion
1. 결과에 대한 고찰(Description)
2. 결과 그래프를 바탕으로 HSP의 고온 향상기작에 대하여 설명해보자.
3. IPTG의 역할에 대해 알아보자

본문내용

Ⅰ. Abstract

이번 실험의 목표는 Hsp17.7이 재조합된 pet11a-hsp17.7과 control인 pet11a의 colony 배양으로부터 각각 IPTG를 처리 후 배양하여 단백질을 발현시키고, 각각 heat shock처리를 하여 이들로부터 Hsp17.7에 의한 단백질 변성 억제 기능을 비교해 확인해 보는 것이다. 그래서 우선 각 활발히 배양된 균주에서 발현된 단백질을 buffer를 이용해 추출해내어 Bradford assay 법과 흡광도 측정을 통해 단백질의 양을 구하고, 이 값을 standard curve에 대입함으로써 시료의 soluble protein의 양을 얻어낼 수 있다. 이 과정은 heat shock 0min, 30min일 때 따로 수행되어 heat shock 전후에 존재하는 soluble protein의 비율을 파악할 수 있다.
그 결과, pet11a(control)에서 얻은 단백질을 heat shock 처리한 뒤에 존재하는 soluble protein을 측정하니 55%만 남아있었다. 반면 pet11a-hsp17.7에서 얻은 단백질을 heat shock 처리 한 뒤 soluble protein의 남은 양을 보니 91%가 남아있었다. 이처럼 pet11a와 pet11a-hsp17.7에서 hsp17.7을 보유한 유무의 차이로부터 나타난 결과를 비교 및 분석을 통해 hsp17.7 단백질은 고온 스트레스에서도 변성되지 않고 오히려 활성화되는 성질이 있으며, 다른 단백질이 고온에 의해 변성되고 망가지는 것을 방지하는 역할을 한다는 것을 파악할 수 있다.
이 실험을 통해서 우리가 얻은 hsp17.7 단백질이 예상대로 고온 환경에서도 변성되지 않고, 다른 단백질들이 침전되지 않고 soluble protein상태를 높은 효율로 유지시켜 준다는 것을 확인할 수 있다.

참고 자료

없음