단백질의 분리 및 정제

목차

1. 단백질의 생산 및 분리
1) Production of proteins
2) Salting-out
3) Dialysis and ultrafiltration
4) Preparation to purification
5) Column chromatography

2. 단백질의 확인
1) SDS-PAGE
2) Isoelectric focusing
3) 2D-electrophoresis
4) immuno-assay
5) Mass spectroscopy
6) Trendem mass, MS/MS spectrometry
7) N-terminal sequence analysis of protein

3. 단백질의 결합 분석
1) Yeast two hybrid
2) Immunoprecipitation
3) Chemical cross linking

4. 단백질체와 단백질체학
1) Proteome and proteomics
2) Analysis of the structure
3) Analysis of the protein expression
4) Analysis of the protein functions

본문내용

1. 단백질의 생산 및 분리
1) Production of proteins
무세포 번역 시스템 (cell free translation)
클로닝 된 유전자가 있을 경우, 유전자를 발현 벡터에 주입하여 바이러스 RNA polymerase와 함께 mRNA 합성 후
▷ 단백질을 생산하는 생체 외 전사 및 번역 방법
· 생체 외 전사 및 번역 방법
: 독성으로 인한 세포 내 발현이 어려울 경우,
단백질이 inclusion body로 생산될 경우,
protease에 의해 빠르게 분해 될 경우
virus promoter가 있는 발현 plasmid 선형화
→ virus RNA polymerase, rNTP 첨가를 통한 RNA 합성
→ 방사성 표지 단백질 합성
→ SDS-PAGE 후 방사선자기사진법으로 확인
단점 : 수득 미량
장점 : 빠른 유전자 산물 획득
활용 : 돌연변이 확인, protein folding, protein modification
2) Salting-out
단백질의 용해도 변화를 통해 수용액으로부터 단백질을 침전시켜 분리하는 방법
· 염석 (salting-out) : 단백질이 높은 염도에서 용해도가 감소하여 침전을 일으키는 현상
· 단백질의 용해도 감소 원인 : 단백질과 결합하는 수화막이 염도가 높아짐에 따라 염과 결합하기 위하여 단백질에서 해리되기 때문
· 장점 : 단백질의 volume 감소
∴ 많은 양의 묽은 단백질 용액을 농축하는 첫 단계에 사용
· 황산암모늄 (ammonium sulfate) : 염석에 가장 많이 쓰이는 화합물
- 장점 : 용해도가 매우 높아 4M 이상의 수용액 제조 가능
단백질을 비가역적으로 불활성화시키는 부작용이 없음
c.f 염해(salting-in)
단백질에 존재하는 이온들의 해리효과에 의해 낮은 염도에서 단백질의 용해도가 증가하는 현상

<중 략>

2. 단백질의 확인
1) SDS-PAGE
단백질을 크기별로 분석할 수 있는 간단하면서도 민감한 단백질에 대한 필수 분석법

참고 자료

없음