생명과학실험 심현보 교수님 Western Blot A+ 짜리

목차

1. Introduction
2. Methods

본문내용

Introduction
(1) 실험 날짜 : 2013년 03월 20일 수요일 3:30-6:15
(2) 실험 주제 : 단백질 분리 및 기능분석(2)
(3) 실험 목표 : Column Chromatography를 이용하여 Alkaline Phosphatase를 분리한다.
(4) 실험 원리

A. Column Chromatography의 원리 : 초기 chromatography형태는 어원에서도 알 수 있듯이, Chroma (색채도), graphy(분석법), 즉 분리된 색을 분석하는 정도였다. 그 후 chromatography 는 분리하고자 하는 혼합물 속에 들어 있는 각 성분의 수, 성질, 상대적인 양 등에 대해서 사전에 상세하게 알지 못하더라도 혼합물을 분리할 수 있는 유용한 방법이다. 색을 분리해내는 이때의 방법과 같이 Column Chromatography의 기본적 원리도 친화성 이론(partition theory)이다. Column Chromatography는 그 친화도를 알기 위해 정지상(stationary phase)으로 resin을 이용한다. 따라서 정지상(or Resin)과 이동상(moving phase)간의 친화도에 따라 분류하는 것이다. 이처럼 Column 속의 정지상으로 쓰일 물질을 채우고, 그 위에 시료혼합액과 함께 이동상을 흘려주면 정지상 사이사이로 시료혼합액과 이동상이 내려가게 된다. 이때 정지상의 성질과 시료의 성질에 따라 잘 흘러내려가는 시료가 있고 그렇지 못한 시료도 있다. 그렇기 때문에 시료혼합용액 속 물질의 성질에 따라 통과 속도에 차이가 생기는 것이다. 따라서 같은 길이의 Column을 통과하는데 걸리는 시간이 시료마다 다르고, 이 시간 차이를 이용해 시료를 분리할 수 있는 것이다.

B. .Column Chromatoraphy 종류 : Column Chromatoraphy는 시료와 고정상 사이의 상호작용(Interaction)의 원리(mechanism)에 따라 분류할 수 있다.
1) 흡착 크로마토그래피 :시료 분자가 고정상에 흡착되는 성질을 이용해서 고정상에 흡착이 잘 되는 시료 일수록 늦게 분리되어 나온다.
2) 분배 크로마토그래피:액체 고정상과 이동상 사이에서 시료 물질이 농도 평형을 이루는 현상을 이용한다.

참고 자료

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