생물화학공학실험 Enzyme activity assay

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
생성물의 농도를 UV Spectrophotometer를 이용하여 측정하여 효소의 활성을 알아보는 실험이었다.
실험방법을 간단히 요약하면, ①tris+pNPB+calB(효소o) ②tris+pNPB+tris(효소x) 2개의 실험군과 대조군을 비교하여 15분, 30분, 45분의 시간간격 대의 Abs를 측정하여 효소에 의해 어떤 차이를 보이는가 알아보는 것이었다.

<중 략>

2) 실험 방법
(1) 24.75ml의 Tris-HCl buffer를 호일을 감싼 50ml tube에 넣는다.
(2) 0.25ml의 pNPB를 넣어 25ml의 0.1mM pNPB 용액을 만든다.
(3) 호일을 감싼 2개의 50ml tube에 각각 10ml씩 옮겨 담는다.
(4) 한 개의 tube에 효소(CalB)를 10μL 넣고, 효소를 넣지 않은 대조군 tube와 함께 shaking incubater에서 45℃로 반응을 한다.
(5) 남은 5ml의 pNPB 용액을 이용하여 반응의 초기값(0min)을 측정한다.
(6) 15분 간격으로 4번 UV spectrophotometer를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정한다.
(7) 측정한 data를 바탕으로 Abs405/min의 그래프를 그린다.
(8) 밑의 식을 이용하여 효소의 Specific activity ( U/mgenzyme)를 계산한다.

<중 략>

4. Discussion
U/mg의 의미는 시간당 넣어준 효소 얼마당 얼마만큼 빠르다는 것을 나타낸다.
효소를 넣어준 것과 넣어주지 않은 것을 보면 Abs값만 봐도 효소를 넣어준 것이 넣어주지 않은 것에 비해 반응속도가 빠른 것을 확인 할 수 있다.
효소를 넣지 않은 것도 빛에 의해 분해되기 때문에 반응이 점차 진행되지만 효소가 하는 기능을 확실히 비교 할 수 있었다.

참고 자료

없음