단백질막 분리, Western blot analysis

목차

I. Introduction
II. 도구
III. 실험방법
IV. 결과
V. 토의
VI. 참조

본문내용

I. Introduction
- 저번 시간에 전기영동이 끝난 gel을 nitrocellulose membrane에 흡착시키는 실험이다. 목적은 단백질의 더 정확한 크기를 알기 위함이다. 전류를 흘려서 loading을 해주면 SDS에 전하가 많기 때문에 gel이 양극으로 끌려가게 되어 membrane이 단백질을 더 잘 흡착하게 된다.
- Southern blot이 DNA를 검출하는 것이고, Northern blot이 RNA를 검출하는 것이라면, 단백질을 검출하는 것엔 Western blot이 있다. 근래에 들어서 Southern blot이나 Northern blot이 다른 여러 핵산 검출법들에 의해 대체되는 경우가 많음에도 불구하고 Western blot은 현재까지도 꾸준하게 사용되고 있는 실험 기법 중에 하나라고 한다.
- Western blot의 원리
Western blot의 원리는 간단하다. 단백질을 전기영동시켜 크기에 따라 분류한 뒤, 원하는 단백질이 이루고 있는 band의 위치를 찾기 위해 항원-항체반응을 이용하는데, 검출하고자하는 단백질을 target으로 하는 detection 가능한 항체를 붙여봄으로써 단백질의 발현여부와 단백질의 발현양의 대략적인 비교를 가능하게 한다.
- 사용하는 항체의 종류와 원리
Western blot에 사용하는 항체는 사용 순서에 따라 Primary Antibody와 Secondary Antibody 두 가지로 나누어볼 수 있다. 때에 따라 Secondary Antibody의 기능까지 같이하는 Primary Antibody가 존재하기도 한다고 한다.
Primary Antibody는 우리가 검출하고자 하는 단백질을 직접 target으로 하는 항체를 말하며 실험실에서는 대개 mouse나 rabbit의 항체를 이용한다. 이 항체는 해당 단백질을 직접 mouse나 rabbit에게 IV injection을 통해 투여하여 mouse나 rabbit의 체액성 면역을 유도해 얻는 방법이 이용되고 있다고 한다. 항체 중에서도 체액성 면역에서 가장 많이 생성되는 IgG가 사용되는 경우가 많다.

참고 자료

http://blog.naver.com/kyjsc0626?Redirect=Log&logNo=100149342374