DNA 분리 및 전기영동
- 최초 등록일
- 2014.05.01
- 최종 저작일
- 2013.10
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목차
1. 서론
2. 재료 및 기구
3. 실험 방법
4. 결과
5. 고찰
6. 결론
7. 참고문헌
본문내용
유전을 담당하는 것으로서 염색체 DNA와 plasmid DNA가 있다. 염색체 DNA에는 세균의 생존에 필수적인 유전자들이 존재하지만 크기가 작은 plasmid DNA에는 항생제 저항성유전자, 독소생성유전자, 특이한 대사관련 유전자들이 있다. 분리된 plasmid DNA를 평판 agarose gel로 전기 영동하여 확인하여 관찰한다. 이후 시료에 제한효소와 RNase를 처리하여 처리 전과 후의 전기영동 상을 비교한다.
<중 략>
2. 재료 및 기구
Glucose/Tris/EDTA(GTE) solution, TE buffer, NaOH/SDS solution, Potassium acetate solution pH4.8, 95%와 70% ethanol, E. coil 대장균 5㎖, microcentrifuge tube(멸균된 것), pipette, pipette tip, 원심분리기, 쿨비즈, DNA용액, TBE(Tris-borate EDTA) buffer, gel loading buffer, ethidium bromide, agarose, UV transilluminator, 전기영동조, power supply, 사진기, BamHI, reaction buffer, RNase
<중 략>
가. DNA 소량 분리
1) Broth에 배양된 세균(대장균)을 1.5㎖ microcentrifuge tube에 옮겨 담은 후 실온에서 12,000rpm으로 3분간 원심분리 하였다.
2) 상층액은 멸균하여 버릴 수 있도록 다른 용기에 부어 두고, 침전물에 GTE용액을 100㎕를 넣고 잘 섞은 후 실온에 5분간 두었다.
3) 다시 SDS/NaOH 용액 200㎕를 첨가하여 부드럽게 위아래 좌우로 섞고 쿨비즈에 5분간 두었다.
4) Potassium acetate 용액을 150㎕ 넣고 2분간 voltex하여 덩어리를 잘 풀고 다시 쿨비즈에 5분간 두었다.
참고 자료
강소영 외 5명, 수산생명학 기초실습Ⅱ, 바이오사이언스, 2006, p195~205