레포트[2rd] SDS PAGE Gel 제조 & Loading & Comassie Brilliant Blue Staining

목차

Ⅰ. Date
Ⅱ. Subject
Ⅲ. Principal & Purpose
Ⅳ. Introduction
Ⅴ. Materials & Apparatus
Ⅵ. Methods
Ⅶ. Discussion
Ⅷ. Reference

본문내용

Ⅰ. Date
2014년 3월 27일

Ⅱ. Subject
SDS PAGE Gel 제조 & Loading & Comassie Brilliant Blue Staining

Ⅲ. Principal & Purpose
단백질을 SDS, urea 또는 2-mercapto ethanol과 같은 환원제로 용해시킨 후, SDS로 (-)전하를 띄게 한 후 size 별로 분리하고자 한다.
단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 검출하기 위해서 전기영동을 이용하여 크기 별로 분리한다. 이 과정에서 단백질을 순수하게 크기 별로 분리해 내기 위해서, 단백질의 단위 질량당 전하량과 3차원적 구조를 모두 같게 해줘야 한다. SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)의 경우에는 SDS를 이용하여 단백질이 모두 단위 질량당 같은 정도의 음전하를 띠게 하여, 각각의 단백질간의 전하 차이를 제거하고, 단백질의 2차원적, 3차원적 구조를 깨뜨려서 모양의 차이로 인한 이동속도의 변화를 없게 해준다. 따라서 SDS-PAGE를 하면 단백질은 크기에 따라 음극으로부터 양극으로 이동하게 되는데 작은 크기의 단백질이 큰 단백질보다 빠른 속도로 이동하여 단백질이 크기에 따라 분리된다. Gel을 Comassie brilliant blue로 염색하여 전기영동으로 분리된 단백질 대(band)를 확인 가능하다.
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Ⅳ. Introduction
(1) SDS-PAGE Gel의 각 materials의 역할
▶Tris-HCl buffer
Running gel에서 단백질들의 Starting line을 동일하게 만들어 주는 역할을 한다.
세포의 형태를 유지시키는 데 중요한 완충작용을 하고, 유기용매 층과 수용액 층 사이에 DNA가 걸려 채취하기 힘든 경우를 방지하기 위해 사용한다. Tris base라고 불리는 Tris(2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol)와 Tris-HCl의 비율을 조절해서 혼합하여 온도에 맞는 적정 pH의 buffer를 제조한다. Tris base의 pH는 몰농도에 따라 10.5~12.0이고, Tris-HCl의 pH는 몰농도에 따라 3.5~5.0이다. 이 둘을 잘 조절하면 원하는 pH의 buffer를 만들어 쓸 수 있다.

참고 자료

http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm, 2014년 3월 29일
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=imannhee&logNo=100150390513.htm,
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=lby51&logNo=50142988555.htm,
https://ww2.chemistry.gatech.edu/~lw26/bCourse_Information/4581/techniques/gel_elect/page_protein.html,
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=tritopsh2566&logNo=40153155580,
http://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%A1%9C%EB%A6%B4_%ED%99%A9%EC%82%B0_%EB%82%98%ED%8A%B8%EB%A5%A8, 2014년 (7) 한국생화학회, 실험생화학, pp100-110, 탐구당, 2004
Bruce Alberts, Molecular Biology of the Cell 4th Edition, pp152-153, pp485-489, Garland Science, 2002
Richard J. Simpson, Proteins and Proteomics, pp40-68, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2003
David L. Nelson, Lehninger Principles of Biochemistry 4th Edition, pp92-93, W. H. Freeman and Company, 2005