젤 전기영동 후 핵산의 회수(gene clean, gel extraction) 실험 레포트

목차

1. 결과
2. 원리
3. 고찰

본문내용

첫 번째 사진이 젤 전기영동으로 분리된 밴드들을 의미한다. 이번 실험에서 밴드가 1개밖에 없는 것을 쓰게 되었지만 실제 실험(gene clean)을 하기 위해선 여러 밴드가 나타난 것을 사용해야 할 것이다. 여러 밴드들 중에서 다음 실험에 이용해야 할 밴드만을 잘라내 추출할 수 있다. 표적 밴드를 오려내고 무게를 측정하여 무게에 맞는 binding sol을 추가한다. 이를 잘 가열하여 젤 덩어리를 녹여내고, column이 끼워진 collection tube에 붓는다. column는 표적 핵산을 걸러내는 역할을 한다. 이 tube를 원심분리하여 핵산 외의 부분을 걸러낸다. washing sol은 에탄올을 주로 사용한다. column을 잘 말린 후 nuclease free water로 DNA를 elution한다. elution된 것에 loading dye를 첨가하여 전기영동 기계에 넣는다. 전기영동한 뒤 UV 하에서 밴드를 확인한다. 실험 결과, 처음의 밴드와 같은 밴드가 나온 것을 확인하였으므로(오른쪽 아래 사진) 제대로 gene clean한 것을 알 수 있다.

[원리]

<전기영동>
전기영동은 분자를 그 크기와 전하에 근거하여 분리하는 표준 생화학 기법이다. 다수의 서로 다른 전기영동 유형이 있으며 DNA분자를 분리하는 데는 젤 전기영동을 이용한다. 다공성 젤은 보통 완충액에 녹여 플라스틱 틀에 부어진 아가로오스(해초에서 분리된 다당류)로 만든다. 이것이 식으면서 아가로오스가 굳어 단단한 젤라틴처럼 보이는 젤을 형성한다.
젤의 한쪽 끝에 DNA 절편 용액을 담은 작은 시료 홈을 만들고 젤을 통과하여 전류를 흘려보낸다. 각 DNA 뉴클레오티드의 인산기는 음전하를 띠므로 DNA 절편은 젤의 양극 방향으로 이동한다. 이 이동에서 다공성 젤은 체로 작용하여 DNA 절편을 크기별로 분리한다. 작은 DNA 절편은 큰 절편에 비해 보다 빠르게 이동하여, 절편은 크기에 따라 분리된다.

참고 자료

전상학(2009) 유전학의 이해. 라이프사이언스, 서울. pp.503505.
유전단백체 기능제어 연구센터, http://www.genehunters.co.kr