단백질정량 결과보고서

목차

1. 실험원리 (Introduction)
2. 실험목적 (Purpose)
3. 실험방법 (Method)
4. 실험결과 (Result)
5. 고찰 (Discussion)

본문내용

1. 실험원리 (Introduction)

(1) 단백질 정량

일반적으로 정성분석에 의해서 물질을 구성하고 있는 성분을 알고 난 다음 정량분석이 행해진다. 단백질 농도를 정량하는 방법에는 UV법, Lowry법, BCA법, Bradford법 등이 있다. 각각의 감도, 간편함, 단백질의 종류에 의한 감도의 차이, 방해물질의 종류와 허용 농도 및 반응액의 pH등에 차이가 있으므로 측정할 대상에 따라 적당한 방법을 선택하여야 한다.

-UV법: 단순히 단백질 용액의 흡광도를 분광 광도계로 측정하는 방법이다. 단백질에는 주로 tyrosine 및 tryptophan의 측쇄로부터 유래된 280nm부근의 흡수가 있으나 buffer에는 이 부분의 흡수를 가지는 것이 적기 때문에 이것을 측정한다. 측정범위는 0.1 ~ 1mg/ml 정도로서 간단하게 sample의 회수가 가능하다. 하지만 흡수는 tyrosine, tryptophan의 비율과 입체구조에 의존하기 때문에 광학계수는 단백질에 따라 다르다. 또한, 단백질에는 주로 peptide결합 유래의 205nm부근의 흡수가 있다. 흡수가 크기 때문에 더욱 고광도로 측정 가능하지만 이 부근의 흡수를 갖는 물질은 굉장히 많기 때문에 흡수가 있어도 그것이 단백질 유래라고는 할 수 없다는 한계를 가지고 있다.

-Biuret법: Biuret은 알칼리성 와 반응하여 보라색의 착화합물을 만드는데 이와 구조가 비슷한 두 개 이상의 peptide 결합을 가진 화합물도 유사한 착화합물을 만들며 단백질의 경우에는 청자색 또는 적자색의 착화합물을 만든다. 이 착화합물의 양은 단백질의 농도에 따라 달라지기 때문에 각각의 서로 다른 농도를 지니는 표준 단백질 용액을 측정하고자 하는 시료용액도 같은 방법으로 처리한 후 standard curve로부터 시료의 단백질량을 측정하는 것이다.

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참고 자료

없음