[수의 생리학 실험] Xenopus laevis oocytes preparation

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Method
Ⅲ. 실험 결과 및 고찰
Ⅳ. Check point

본문내용

Ⅰ. Introduction

① Purpose : 전기생리학에 대한 이해와 준비를 위해 Xenopus laevis oocytes를 준비하는 과정과 연관성에 대해 이해한다.

② Materials : Xenopus laevis, pincette, scissors, collagenase, needle, needle holder, Cat-gut 봉합사, OR2 solution, ND96 solution, shaker, petri dish, oocyte holder
Ⅱ. Method

1. Oocytes isolation
1) Xenopus laevis 개구리를 0.1% 3-amino benzoic acid ehtyl ester solution 또는 Ice에 묻어 마취시킴.
2) 충분히 마취되어서 움직이지 않으면 의 복부의 피부를 5~7mm 정도 절개한 후 복근막과 복근을 절개하여 oocytes를 채취한다. 채취시 너무 덩어리 지지 않게 잘게 잘라준다.
3) 개구리의 복근과 근막을 Cat-gut 봉합사로 함께 봉합하고 그 후 피부를 봉합한다.
4) 채취한 oocytes를 50ml conical tube에 Type 2 Collagenase 1.5mg/ml(OR2 solution)에 넣고 약 1hr 30min 정도 실온에서 shaking 해준다.
5) Oocytes가 충분히 분리 되었다고 생각되면 ND96 solution으로 4번 이상 washing 해 준다.
6) Washing한 oocytes를 100Ø dish에서 5~6 stage 크기의 건강한 oocytes를 분리해서 따로 모은다.

Ⅲ. 실험 결과 및 고찰

Xenopus laevis 개구리에서 복부를 절제하여 oocyte를 꺼낸 후 다시 봉합하였다. 채취한 oocyte에 collagenase를 처리한 후 5,6 stage 크기의 건강한 oocyte를 다음 실험을 위해 분리해서 따로 모아야 하는데, 그 전에 크기순서대로 oocyte를 정렬해 각 stage의 oocyte를 살펴보는 시간을 가졌다.

참고 자료

없음