실험3. Polymerase Chain Reaction(PCR)을 이용하여 pMFGtk으로부터 tk gene의 대량생산
- 최초 등록일
- 2013.12.01
- 최종 저작일
- 2013.10
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목차
가) 실험 이론과 원칙
나) 실험 재료와 방법
다) 실험 결과
라) 고찰과 결론
마) 참고 문헌
본문내용
가) 실험 이론과 원칙
① 실험 목적
PCR하는 방법을 알고 전기영동 결과를 통해 TK coding sequence의 size를 확인한다.
②Polymerase Chain Reaction(PCR)
중합효소 연쇄반응은 이미 알려진 특정 DNA 부위를 두 개의 시발체(primer)를 이용하여 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 미량의 DNA를 10 ^{ 6}배의 다량의 DNA를 얻을 수 있는 중요한 분자생물학적 기법이다. 이러한 과정에는 DNA 중합효소가 관여함으로써 가능하다. 즉, genomic DNA 와 같은 거대한 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel 이나 폴리아크릴 아마이드 젤 상에서 뚜렷하게 보이는 띠로 가시화 할 수 있다. 이와 같이 증폭된 DNA를 여러 의학적인 연구에 적용할 수 있으며, HLA형의 결정, 법의학 분야에서 특정인의 유전자 검출, 암 유전자의 검출, 유전성 질병의 진단 그리고 감염성 질환의 진단 등에 이용되고 있다.
<중 략>
gel에 홈을 만들어 DNA나 RNA, 단백질 등의 분자를 집어넣고 전류를 흘려주면 음전하를 띤 이들 분자들은 전기적인 힘에 의해 gell 안에서 이동하게 된다. 같은 크기를 가진 분자들은 하나의 집단을 형성하여 움직이게 되는데 만약 수조개의 동일한 분자들을 전기영동 하였다면 gel을 염색하였을 때 이것이 하나의 띠 모양으로 나타나는 것을 확인할 수 있다. 전기영동할 때 DNA가 agarose gel 속을 이동하는 속도는 크기(분자량)와 입체구조에 따라 다르다. 이 성질을 이용하여 DNA의 형태 해석이나 분자량을 측정할 수가 있다. agarose gell 전기영동은 gell의 농도에 따라 DNA 절편을 효과적으로 분리할 수 있는 범위가 다르며, 주로 0.5~25kb의 크기를 가진 DNA 절편을 분리하는데 쓰인다.
참고 자료
이종원, 생화학 실험 교재, 대구 가톨릭 대학교 의과대학, 29쪽-36쪽
Pamela C. Champe, 리핀코트의 그림으로 보는 생화학, 제 4판, 도서출판 신일북스 2009년, 479쪽-483쪽
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1261192&cid=200000000&categoryId=200000864