염색 1

목차

1. 단염색
2. 그람염색
3. 항산성 염색.
4. Reference

본문내용

실험목적: 세균염색법의 원리를 이해하고, 직접 실험에서 응용한다.

Result & Discussion
1. 단염색
세균의 세포에는 negative charge를 띠는 nucleic acid가 많이 존재하기 때문에 positive charge를 띠는 basic dye를 이용하여 염색을 하면 세균의 형태와 배열을 관찰할 수 있다. 이 때 주로 메틸렌블루를 사용한다. 메틸렌블루의 화학식은 C16H18N3SCl·3H2O으로, 용매에 녹이면 이온화되어 C16H18N3S+와 Cl-를 만든다. 메틸렌블루는 결정상태에서는 녹청색을 띠고, 이온화되면 C16H18N3S+에 의해 푸른색을 낸다. 따라서 메틸렌블루용액을 세포에 몇 방울 떨어뜨리면 세포질에 있는 음전하를 띠고 있는 풍부한 nucleic acid가 이 양이온에 binding하여 염색이 된다. 따라서 세균의 모양과 배열을 관찰할 수 있다.

<중 략>

2. 그람염색
Gram positive 세균은 cell 주위에 thick, cross-linked, Meshlike structure를 가진 peptidoglycan layer가 둘러싸고있어 탈색되지 않고, crystal violet을 retain하는 반면, gram negative 세균은 peptidoglycan layer가 thin하므로 탈색제인 유기용매에 의해 crystal violet 상실하고 그 후 counter stain인 safranin에 의해 붉은색으로 염색된다.
Gram 염색을 이후 실험에서도 매우 자주 실행했는데 계속하면서 익숙해져서 더 잘나오긴 했지만 여러번 실수를 하기도 했다. 염색 순서를 바꾸어 한다든지의 실수가 좀 있었고, 한번은 너무 많은 균을 따서 염색이 너무 심하게 되어서 오히려 균이 전혀 안 보이는 경우도 있었다. 그리고 가끔씩 gram 양성 세균인데 붉게 염색되는 경우도 있었는데 이는 aid alochol탈색을 너무 오래해서 또는 crystal violet이 제대로 염색되지 않아서 그런결과가 나온 것 같다.

참고 자료

대한미생물학회, 『의학미생물학실습』, 서흥출판사, 제 5판, 2005.
Patrick R. Murray 외 2명, Medical Microbiology, 6/ed, 2009, ELSEVIER