Quantitation of protein using BSA standard

목차

1. Title
2. Materials
3. Methods
4. Result
5. Discussion
6. reference
7. Type of colorimetric protein assay

본문내용

Title
Quantitation of protein using BSA standard

Materials
p20, p200, p1000, rack, tip, tube, incubator, spectrophotometer, vortex, 96-well plate, 증류수, BCA reagent (A).(B), BSA solution, 농도를 모르는 protein, 쓰레기통

Methods
1. 7개의 1.5㎖ Tube에 증류수를 각각 40㎕ 넣는다.
2. 2㎎/㎖(2000㎍/㎖)인 stock solution(BSA solution)을 1000㎍/㎖의 Tube에 넣고 Vortex를 이용해 잘 섞어준다.
3. 2번의 Tube에서 40㎕를 추출하여 500㎍/㎖ Tube에 넣고 Vortex를 이용해 잘 섞고 이것을 다시 40㎕를 추출하여 250㎍/㎖ Tube에 넣고 잘 섞어준 뒤 이를 다시 40㎕를 추출하여 125㎍/㎖ Tube에 넣는 방법으로 나머지에도 차례대로 적용한다.(serial dilution)

<중 략>

1)Lowry assay
알칼리성에서 단백질이 Folin-Ciocalteau시약을 만나 환원되면서 착색되는 원리를 이용한 것으로 Biuret원리(알칼리성에서 단백질의 펩타이드 결합과 구리가 반응해 Cu++이온을 생성)에 기초를 두고 있다. 생성된 구리가 무기염혼합물인 Folin시약과 Folin-Ciocalteu반응을 하는데 phosphomolybdotungstate가 구리에 의한 방향족 아미노산의 산화에 의해 heteropolybdenum blue로 환원되는 반응에 의해 진한 푸른색을 발색한다.

-장단점
● 단백질이 침전되어 있더라도 측정할 수 있으며, 단백질의 양에 비례하여 색도가 증가함.
● 0.01~1.0㎎정도의 미량정량에도 사용가능.
● Biuret원리과 밀론 시험의 장점을 모아놓은 방법으로 발색정도가 강함.
● pH에 매우 민감하며 준비과정이 복잡하다.
● Biuret원리에 기초를 두고 있기 때문에 단백질의 종류에 따라 그 값이 변할 수 있음

<이하생략>

참고 자료

단백질 프로토콜/안태호/전남대학교출판부/2012/p.42~43
약품생화학실험/약품생화학분과회/신일북스/2011/p.57~58