E.coli 배양 예비

목차

1. 실험목적

2. 실험원리
(1) E.coli (Escherichia coli)
(2) 배양(Culture)
(3) 배지(Culture Medium)
(4) 제한효소(Restriction enzyme)
(5) 플라스미드(Plasmid)
(6) 형질전환(Transformation)
(7) Competent cell

3. 시약 및 기구
(1) 시약
(2) 기구

4. 실험 방법

본문내용

1. 실험목적
- E.coli를 배양하기 위해 필요한 배지의 제조방법을 습득하고 이해한다. 또한 플라스미드의 추출법과 미생물의 동정(물질의 운동과 정지) 및 환경요인과 미생물의 관계 등을 알 수 있다.
- ampicilline 저항성 유전자를 가진 플라스미드를 대장균(E.coli)에 삽입하여 형질전환 하여 적절한 배지에서 배양한다.

2. 실험원리

(1) E.coli (Escherichia coli)

★ 대장균이란?
대장균(Escherichia coli, E. coli)은 온혈 동물의 창자(대장과 소장)에서 많이 볼 수 있는 박테리아이다. 대부분의 대장균의 변종은 해롭지 않지만, 어떤 대장균은 사람의 식중독을 일으키며, 가끔 대규모의 식품 리콜의 원인이 된다. 해롭지 않은 변종은 대장의 공생동물이며 비타민 K2등을 생산하여 이로움을 주기도 하며, 창자에서 병의 원인이 되는 박테리아의 번식을 막기도 한다.

<중 략>

★ A. 배지 만들기
① 고체배지: 250 mL 삼각 플라스크에 LB broth 2.5 g + 증류수 100 mL + Agar 1.5 g
액체배지: 250 mL 삼각 플라스크에 LB broth 1.3 g + 증류수 50 mL
덩어리가 잘 보이지 않을 때까지 잘 흔들어 녹여준다.
② 250 mL 삼각 플라스크 2개의 입구에 각각 은박지로 입구를 덮는다.
③ 고온, 고압으로 멸균시키기 위해 121 ℃, 2 hr 설정으로 autoclave 한다.
* Check: 압력밸브가 잠겼는지 확인 후 Autoclave 내에 증류수를 열선까지 일정량 채운다.
(→ 보통은 setting이 다 되어 있으므로 전원을 켜고 sample을 넣고 “start” 버튼을 2번 누르면 시작.)
* Autoclave 하는 약 2 hr 동안 B.실험 진행한다. *

참고 자료

없음