2.형광현미경 관찰

목차

1. Topic
2. Purpose
3. Material
4. Method
5. Result
6. Discussion
7. Reference

본문내용

1. 배양 중인 U937 cell 을 15ml tube로 10ml 옮긴 후 원심 분리한다. (RT, 1200rpm, 5min)
2. 상층액 제거 후, 1xPBS 10ml로 부유시킨 후 Hemocytometer이용해 cell counting한다.
3. 다시 원심분리 후 상층액을 제거하고, 15ml tube 안에 1x10^6cells/ml이 되도록 1xPBS로 부유시킨 후, 1ml을 덜어 1.5ml tube에 넣고 원심 분리한다.
4. 상층액을 제거한 후, 세포 pellet에 CFDA-SE 희석용액 500ul (처리 농도: 10uM) 를 넣고 pipetting하여 세포를 잘 풀어준 후, 호일로 빛을 차단한 채 8분 동안 gentle vortex / tapping한다.
FBS (500ul)를 추가로 넣고 1분 동안 gentle vortex 한다.
5. 원심분리를 한다.
6. 상층액을 제거한 후 1xPBS 1ml을 넣고 pipette을 이용해 세포를 잘 풀어준 후, 원심 분리한다.
7. 상층액을 제거한 후, 한번 더 1xPBS 1ml을 넣고 pipette을 이용해 세포를 잘 물어준 후, 원심 분리한다.

참고 자료

An overview of mounting media for microscopy. MicrobeHunter (Microscopy magazine Blog)