SDS PAGE Gel 제조

소개글

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목차

Ⅰ.실험 제목

Ⅱ.실험 목적

Ⅲ.원리
(1) SDS-PAGE Gel 제조 시 각 materials의 역할
(2) Running Gel과 Stacking Gel의 pH가 다른 이유
(3) Acrylamide와 Bisacrylamide의 결합구조식
(4) Coomassie Brilliant Blue Staining

Ⅳ.실험재료

Ⅴ.실험방법

Ⅵ.결과

Ⅶ.토론
(1)실험 시 특이사항
(2)SDS-PAGE 실험의 의의
(3)Coomassie staning 분석

Ⅷ.참고문헌

본문내용

Ⅰ.실험 제목
SDS PAGE Gel 제조 & Loading & Coomassie Briliant Blue Staining

Ⅱ.실험 목적
단백질을 SDS, urea 또는 2-mercapto ethanol과 같은 환원제로 용해시킨 후, SDS로 (-) 전하를 띄게 한 후 size 별로 분리하고자 한다.

Ⅲ.원리
(1) 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 검출하기 위해서 전기영동을 이용하여 크기 별로 분리한다. 이 과정에서 단백질을 순수하게 크기별로 분리해 내기 위해서, 단백질의 단위 질량당 전하량과 3차원적 구조를 모두 같게 해줘야 한다. SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)의 경우에는 SDS를 이용하여 단백질이 모두 단위 질량당 같은 정도의 음전하를 띠게 하여, 각각의 단백질간의 전하 차이를 제거하고, 단백질의 이차원적, 3차원적 구조를 깨뜨려서 모양의 차이로 인한 이동 속도의 변화를 없게 해준다. 따라서 SDS-PAGE를 하면 단백질은 크기에 따라 음극으로부터 양극으로 이동하게 되는데 작은 크기의 단백질이 큰 단백질보다 빠른 속도로 이동하여 단백질이 크기에 따라 분리 된다. Gel을 Coomassie Brilliant Blue로 염색하여 전기영동으로 분리된 단백질 대(Band)를 확인 가능하다.
(2) SDS-PAGE Gel 제조 시 각 materials의 역할
① Tris-HCl buffer
Running gel에서 단백질들의 Starting line을 동일하게 만들어 주는 역할을 한다.
② 40% acrylamide-bisacrylamide
가교제로서 중합반응을 통해 gel의 격자구조를 형성하는 역할을 한다.
③ SDS (Sodium Dodecyl Sulfate)
단백질이 SDS와 결합하면서 (-) charge를 띄게 되므로서 denatured된 단백질이 막대기처럼 펼쳐진 상태로 acrylamide가 이루는 그물구조를 통과 할 수 있게 하는 역할을 한다.
④ APS (Ammonium Persulfate Acrylamide)
Acrylamide의 중합을 개시하는 역할을 한다.

참고 자료

2013.04.07, http://www.genehunters.co.kr/Training/031.htm
2013.04.07, http://blog.naver.com/PostView.nhn blogId=imannheelogNo=1001 50390513.htm
2013.04.07, http://blog.naver.com/PostView.nhn blogId=lby51logNo=5014298 8555.htm