플라스미드DNA의추출

목차

1.실험 제목
2.실험 목표
3.실험 날짜
4.실험 전 사전 지식
5.실험 재료
6.실험 방법
7.실험 결과
8.고찰
9.Reference

본문내용

1.실험 제목: Plasmid DNA의 추출과 제한효소를 이용한 DNA절단 및 전기영동

2.실험 목표:
① 배양된 대장균을 이용하여 플라스미드 DNA를 추출할 수 있다.
② 추출한 DNA의 농도와 순도 측정 방법과 원리를 이해한다.
③ 제한 효소가 DNA에 어떻게 작용하는지 이해한다.
④ DNA를 절단하는 효소의 종류와 그 효소의 작용을 이해한다.
⑤ 제한 효소에 의해 절단된 DNA 조각들의 크기를 전기영동방법으로 분석할 수 있다.

<중 략>

Tube를 37℃로 설정된 배양기에 20~30분간 넣어둔다.
2. Agarose gel만들기
3. Agarose gel 전기영동
①. 전기영동 장치에 굳은 gel을 올려놓은 후에 전기영동 완충용액(1X TAE)을 부어 gel이 살짝 잠기게 한다. (1mm정도)
②. 반응(Enzyme reaction)이 끝난 DNA샘플(20㎕)에 6X Loading dye 4㎕을 첨가한 후 pipetting하여 잘 섞는다.
③. Gel의 well에 DNA+염색액 12㎕를 잠겨있는 gel의 홈에 조심스럽게 가한다.
④. Well에서 먼 쪽이 (+)극이 되도록 전선을 전원 공급 장치에 연결시킨 후 120V로 30분간 running한다. (Loading dye가 아가로스 젤의 3/4정도까지 이동하면 전원을 끈다)
⑤. 전기영동이 끝나면 전기를 끄고 도선을 제거한 후 전기영동 된 gel을 UV illuminator위에 올려놓고 band 확인 및 사진촬영을 실시한다.

참고 자료

민철기, 강창수 / 생물학실험서 / 라이프사이언스 / 2004.1.20 초판 2006.1.15 수정판