Western blotting

목차

Ⅰ. Western blotting - 1
1. 목적
2. 실험재료 및 방법
3. 결과 및 토론

Ⅱ. western blotting - 2
1. 목적
2. 실험재료 및 방법
3. 결과 및 토론

본문내용

목적
양을 측정하려는 특정 단백질을 실험쥐의 장기에서 조직채취 후 isolation하고 냉장시킨다.
실험재료 및 방법
1.실험재료
에테르(ether), 수술도구 [포셉(forcep), 가위(scissors), 칼/매스(blade/mass] 염분(saline), sample case, lysis buffer, 원심분리기(centrifugation), vortex, deep freezer, 흰 쥐, 청결장갑, e-tube, sample box
2.방법
- 실험쥐를 마취시킨 후 ether를 이용하여 sacrify시킨다.
- forcep, scissors, blade and mass 등의 수술도구를 사용하여 실험쥐의 배를 가르고 심장을 노출시킨다.
- 관류고정을 위해 우심이를 자르고 좌심실에 바늘을 꽂아 0.9%의 NaCl(saline:생리식염수; 체액과 비슷함.)을 넣는다.
- 10%의 formalin을 주입해 완전히 perfusion한다.
- heart와 liver을 적출하여 isolate tissue한다.

< 중 략 >

1.실험재료
SDS-PAGE(전기영동기계), micro centrifuge, heat block, sample buffer, running buffer, rotator, size marker, pipette, tube, 증류수,
2.실험방법
- 적출한 장기에서 떼어 내서 전기영동 한 조직표본들을 준비한다.
- 파이펫으로 sample buffer을 체취하여 새 tube에 넣는다. 그 tube에는 각 조의 숫자와 실험 날짜, 그리고 적출한 장기의 이름을 적는다.
- 준비한 조직이 담겨 있는 tube를 tapping한 후에 pipette으로 체취하여 sample buffer가 들어 있는 tube에 넣는다. 다시 tapping한다.
- 뭉쳐 있는 단백질을 1차 구조로 펴 주기 위하여 조직 단백질이 들어 있는 tube를 heat block에 넣고 약 5분간 100도씨에서 끓인다.
- 미니 원심 분리기에 넣은 후 약 30초 정도 돌려 준다.
- 전기영동(SDS-PAGE)에 12%의 아크릴아마이드 젤을 꽂는다.
- 젤에 있는 well에 pipette을 이용하여 heat block에서 끓인 샘플들을 각각 넣어 준다. 영동기계의 양 끝은 각각 양전하와 음전하처럼 반대 부호로 걸어준다.
- SDS-PAGE의 나머지 공간에는 running buffer로 채운다.

참고 자료

없음