[생물학실험] [서울대] 배지 만들기와 형질전환 (Preparation of culture media and Transformation)

소개글

미생물 배양에 쓰이는 LB 배지 (luria bertani medium)를 만들고, E. coli competent cell에 ampR (암피실린 저항성) 유전자를 도입하고, 형질전환된 cell과 대조군 cell을 각각 배지에 배양하여 비교한 실험입니다.

목차

I. 실험 목적

II. 이론적 배경
1.세균의 도말
2.암피실린(Ampicillin)과 AmpR gene

III. 실험 재료

IV. 실험 방법

V. 실험 결과

VI. 논의
1.다양한 멸균 방법 조사
2.Competent cell을 만드는 방법
3.vector의 multi-cloning site 종류와 cloning하는 방법

본문내용

I. 실험 목적
① 미생물을 배양하기 위한 배지를 만들어 본다.
② Competent E.coli를 이용한 Transformation 방법을 알아본다.

II. 이론적 배경
세균의 도말
세균을 배양할 때는 시료를 넓게 퍼트려 단일 콜로니로 분리하는 것이 필요하다. 이때 시료를 퍼뜨리는 과정을 도말이라 한다. 도말법에는 다음과 같은 종류가 있다.
① 평판 도말법(Streak-plate method): 멸균한 백금이 끝에 세균을 묻혀 평판배지에 지그재그로 그어 분산시키는 방법이다.
② 주입 평판법(Pour-plate method): 고체배지의 표면에 세균이 희석된 45~50℃의 액체배지를 주입하고 골고루 분산시키는 방법이다.
③ 분산 도말법(Spread-plate method): 삼각 유리봉 끝에 세균 배양액을 묻혀 평판배지에 분산시켜 도말하는 방법으로, 이번 실험에서 사용하는 방법이다.
④ 첨자법(Stab-inoculation): 부분적인 혐기조건을 만들거나 생성된 기체의 확산을 방지하기 위해, 순수분리된 세균을 장기 보관하기 위해 사용하는 방법이다. 접종침을 이용하여 고체배지 내부에 세균을 접종한다.1)
암피실린(Ampicillin)과 AmpR gene
암피실린은 beta-lactam 계열의 aminopenicillin family에 속하는 항생제로, 최초로 개발된 항생제 중 하나이다. 그람 양성균과 많은 그람 음성균의 세포막을 침투할 수 있으며, 세균의 펩티도글리칸층 합성에 관여하는 transpeptidase에 대한 억제자(inhibitor) 역할을 하여 세포분열을 방지하고 용균(lysis)에 이르게 한다.2)
AmpR gene은 암피실린 저항성 유전자(ampicillin resistance gene)의 약자이다.

참고 자료

한국미생물학회, 미생물학 실험서, 을유문화사, 1998
AHFS Drug Information, 2006 edition, American Society of Health-System Pharmacists, 2006
C.H.Collins et al, Collins and Lyne's Microbiological Methods, 7th edition, CRC press, 1995, p.
Godfrey Sykes, Disinfection and Sterilization, Pitman Press, 1958
J.Sambrook and David W.Russell, Molecular Cloning: A laboratory manual, 3rd edition, CSHL Press, 2001, 1.116-1.122