Lab 3. 단백질 정량법

목차

1. 실험 배경
2. 실험 재료
3. 실험 방법
3. 참고문헌

1. 실험목적
2. 실험재료 및 기구
3. 실험 방법
4. 실험결과
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험 배경

1) Bradford Assay

UV-Visible spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정하여 standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)나 BGG(Bovine Gamma Globulin)를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법 중 하나이다. 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. Dye로는 Coomassie Blue G-250를 사용하며, 이 dye가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다.

Acidic environment reagent조건 하에서 단백질은 Coomassie dye에 결합하는데 이 결과로 reddish/brown form(465nm에서 최대 흡광)이던 dye는 blue form(610nm에서 최대 흡광)으로 스펙트럼 이동이 일어나게 된다. 두 가지 form의 차이는 595nm에서 최대가 되는데, 따라서 이 파장이 Coomassie dye-protein complex의 blue form을 측정하는데 최적의 파장이 된다. 575nm~615nm사이의 어느 파장에서든 blue form을 측정할 수는 있지만 595nm에서 측정한 것보다 측정되는 흡광도 값이 10%정도 낮아지게 된다.

<중 략>

2) 실제우유에 표기된 6g보다 작은 값이 나왔다.

① 제품에 표기된 6g은 많은 우유중 표본추출을 통해 나온결과를 표기한것이므로, 약간의 오차가 있을수 있다.
② 1)-④에서 언급했듯이, 전체 200ml에 비해 너무 적은 양을 가지고 큰 양을 추측하므로 작은 오차에도 큰 계산상 오차가 생긴다.

3) BSA 20ul과 100ul을 넣었을때 추세선을 많이 벗어나는 data가 나왔다.

① Cuvette내에 기포가 생겼을 수 있다.
② Cuvette이 잘 세척되지 않아 이전에 측정했던 단백질이 남아 좀더 큰 data가 나왔을 수 있다.
③ 측정부분에 지문이나 이물질이 묻어 좀더 큰 data가 나왔을 수 있다.

4) 첫 번째 실험은 말도 안되게 잘못된 data가 나와 다시 실험하였다.

참고 자료

http://blog.yahoo.com/_GMUAJJE6SCV7WFYMAANT4OSCA4/articles/130009
http://sadya.tistory.com/191