결과.Genomic DNA isolation and DNA amplification

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험이론
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 실험고찰
7. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목
Genomic DNA isolation and DNA amplification

2. 실험목적
Genomic DNA 분리의 과정을 이해하고 PCR을 사용하여 DNA를 증폭시켜본다. 전기영동으로 DNA를 확인한다.

3. 실험이론
Chromosomal DNA (Genomic DNA, gDNA) : 생명체의 세포내 존재하는 것으로 유전적 정보를 가지고 있다. 배양으로 증식된 세포를 이용하여 cell lysis 후 RNase처리(RNA 제거)나 페놀, protease처리(단백질 제거)를 하여 DNA를 분리한 뒤 에탄올 처리(침전)후 DNA를 분리한다. 물리적인 방법으로 boiling을 통해 분리할 수 있다.
boiling method (비등법) : bacteria는 lysozyme, Triton(a nonionic detergent), 열처리등으로 깨어질수 있다. chromosomal DNA는 세포막에 결합된 상태로 남아있게 되고 원심분리로서 침전시켜 모을수 있으며 plasmid DNA는 상등액에 남아있게 된다. boiling miniprep는 적은 양의 DNA를 분리할 때 쓰이는 방법이지만 분리된 DNA는 alkaline lysis miniprep 등의 다른 방법보다 quality가 떨어진다.
PCR (Polymerase chain reaction) : PCR은 DNA분자의 특정부위를 선택적으로 증폭시킨다. 어떤 DNA분자의 어떤 부위라도 선택될 수 있다. Border sequence들은 PCR이 수행되기 위해서 알려져 있어야 한다. 또한 두 개의 짧은 oligonucleotide가 이중나선의 각 가닥과 혼성화되어야만 한다. DNA합성반응을 위한 primer로써 역할을 하는 이들 oligonucleotide들은 증폭될 부위의 범위를 정해준다.
일반적으로 증폭반응은 Thermus aquaticus로부터 정제된 DNA polymerase I에 의해 수행된다. 이 생물체는 온천에서 서식하고 있고, 열처리에 의한 변성에 대해 저항성이 있다. thermostability는 PCR methodology에서 필수적인 요건이다.

참고 자료

http://blog.naver.com/vocoga7306/80064053671
http://blog.naver.com/tohmo/100010428538
충북대학교 자연과학대학 미생물학과 분자 생명공학 및 생명정보학 연구실.
최신미생물학 실험, 박석기 외, 신광문화사.
Microbiology, Prescott 외, Mcgraw-hill.