결과.Amplification of DNA and produce of recombinant DNA molecule

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험이론
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 실험고찰
7. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목
Amplification of DNA and produce of recombinant DNA molecule

2. 실험목적
DNA를 재조합 하고, PCR을 통하여 증폭시켜서 측정해본다.

3. 실험이론
그림 1)의 과정 도식화
DNA recombinant :
유전공학적으로 외래의 DNA배열에 그 일부가 치환한 DNA분자를 의미하며 일반적으로 표적단편인 DNA분자와 매개체분자의 조합에 의해 형성되기 때문에 재조합DNA라고도 한다.
크게 세 과정으로 이루어지는데, 1) 다른 세포로부터 분리한 DNA 조각을 알맞은 벡터(vector, 유전자의 운반체)에 삽입시켜서 재조합 DNA를 만드는 과정과 2) 제조한 재조합 DNA를 새로운 숙주세포(host cell)속으로 이입시키는 과정과 3) 필요한 외래 유전자를 발현하는 숙주세포를 분리하는 과정이다.

PCR( Polymerase Chain Reaction) : DNA의 원하는 부분을 복제·증폭시키는 분자생물학적 기술이다. 이 기술은 복잡하며 양이 지극히 미량인 DNA 용액에서 연구자가 원하는 특정 DNA 단편만을 선택적으로 증폭시킬 수 있다. 실험 과정이 단순하고, 전자동 기계로 증폭할 수 있기 때문에, DNA를 취급하는 작업 전반에서 지극히 중요한 역할을 담당하고 있다. PCR에는 일련의 세 개의 단계가 있고 30~40회 정도 반복된다.
1) DNA 변성(Denaturation). 두 가닥의 DNA는 가열함으로써 분리시킬 수 있다. 분리된 각각의 DNA는 주형(Template)으로서 역할을 하게 된다. 변성 온도는 DNA 내에 있는 G+C의 양과 길이에 따라 달라진다.
2) 결합(Annealing). 이 단계에서는 시발체(Primer)들이 주형 DNA에 결합을 하게 된다. 결합(Annealing) 온도는 반응의 정확성을 결정하는 중요한 요소인데 만약 온도를 너무 높게 하면 시발체가 주형 DNA에 너무 약하게 결합되어서 증폭된 DNA의 산물이 매우 적어진다. 또 만약 온도를 너무 낮게 하면 시발체가 비특이적으로 결합하기 때문에 원하지 않는 DNA가 증폭될 수 있다.

참고 자료

생명과학대사전, 강영희, 아카데미서적, 2008.
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_14.php (연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실)
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http://www.fermentas.com/en/support/technical-reference/phage-plasmid-dna/pbluescriptII (이미지 참고)