Ligation, Ecoil transformation 예비보고서

소개글

Ligation,transformation,형질전환,대장균,restriction enzyme,Competent cell

에 대한 내용입니다. 실험 예비보고서로 E.coil의 transformation에 대해서는 빠진 내용없이 작성되었습니다.

실험실에 소속되어 있을때 작성했던 레포트로 내용이 좋습니다.

특히 레포트중

Restriction은 37℃했으나 왜 4℃에서 O/N으로 Ligation을 하나? 혹은 restriction 온도보다 낮은 온도(상온등)에서 하나?

라는 내용은 여러 문헌과 박사과정 선배들과의 질답을 통해 좋은 내용을 담았습니다.

목차

1. restriction enzyme
1) Restriction enzyme의 분류
2) Restriction enzyme의 특징
Restriction enzyme의 종류

2. Ligation
Ligase의 작용
1) Ligase
2) Ligation
3) Q. Restriction은 37℃했으나 왜 4℃에서 O/N으로 Ligation을 하나? 혹은 restriction 온도보다 낮은 온도(상온등)에서 하나?

3. Transformation
1) E.coil transformation & Plasmid
2) Competent cell

참고문헌

본문내용

실험이론
1. restriction enzyme
1) Restriction enzyme의 분류
핵산 분해효소에는 다양한 종류가 존재한다. 크게 나누면 핵산 말단 분해효소(exounclease)와 핵산내부 분해효소(endonuclease)가 있다. 이중 제한효소(restriction enzyme)은 핵산내부 분해효소에 속한다.
제한효소는 DNA 분자를 특정 위치에서 절단한다. 제한효소에는 3가지 유형이 있는데 I형과 III형은 인식되는 자리와 잘리는 자리가 엄격하지 않아서 연구시 사용되지 않는다. II형은 모든 절단이 동일한 자리에서 일어나기 때문에 연구시 유용하다.
이러한 제한효소는 세균이 박테리오파지의 공격을 받으면 생산하는 효소이다. 외부에서 DNA가 침입하면 제한효소가 이를 잘라 방어한다.
2) Restriction enzyme의 특징

<중 략>

앰피실린 저항 유전자는 selective marker로 유용하다. 하지만 이는 해당 plasmid가 E.coil에 삽입된것만을 나타낼뿐 이 plasmid가 재조합이 된(원하는 gene이 제대로 끼어들어간) plasmid인지는 알수 없다. 따라서 이러한것을 제대로 선별하기 위해 lac selection을 사용하기도 한다. 이는 MCS가 lacZ`gene에 있게되고 이 lacZ`gene에 DNA가 삽입되면 lacZ`gene가 파괴되게 되고 β-갈락토스를 분해할수 없게 되어 colony의 색이 흰색으로 나타나게 된다. 만약 lacZ`gene이 파괴되지 않았다면 colony가 파란색으로 나타나게된다.

참고 자료

http://en.wikipedia.org/wiki/DNA_ligase
Genomes 3 유전체 분자생물학 / 이동희 외 / 월드 사이언스 / 2008
왓슨 분자생물학 6판 / 저자 Watson 외 / 바이오 사이언스 / 2010
Gene Cloning and Manipulation / Christopher Howe / Cambridge University Press / 2007