[식품생명공학] Blotting

목차

Ⅰ. WESTERN BLOTTING
1. 원리
2. 방법
3. 용도
4. 실험절차

Ⅱ.SOUTHERN BLOTTING
1. 원리
2. 방법
3. 용도
4. 실험절차

Ⅲ. NORTHERN BLOTTING
1. 원리
2. 용도
3. 방법
4. 실험절차

본문내용

1. 원리
여러 가지 단백질들을 포함하고 있는 세포 또는 조직의 추출물을 전기영동하여 그 속에 들어 있는 단백질들을 크기 별로 구분한 다음 흡착지에 옮겨 놓고 조사하고자 하는 단백질의 항체와 결합시켜 그 단백질의 존재 유무와 크기등을 밝히는 검사이다. 그러므로 면역 blotting이라고도 부른다.
2. 방법
여러 가지 단백질들을 함유하고 있는 혼합액을 SDS가 포함되어 있는 polyacylamide gel에서 전기영동하여 단백질들을 크기에 따라 분리하여 나열시킨다. polyacylamide gel에 nitrocellulose 또는 nylon흡착지를 겹쳐 놓고 전기를 걸어 gel 속에 있던 단백질들을 흡착지로 이동시킨다. 흡착지를 보합결합 주머니에 넣고 어떤 단백질의 항체를 포함한 보합결합 용액과 함께 배양한 후, 다시 그 항체에 대한 항체와 반응시킨다. 이 때 이차항체에는 바이오틴이 결합되어 있어서 아비딘이 결합된 페록시다아제와 반응시키면 아비딘-바이오틴의 강력한 결합력 때문에 항원-일차항체-이차항체의 혼합체는 결국 페록시다아제를 가지게 된다. 마지막 단계에서 과산화수소와 발색제를 함유한 반응액으로 처리하게 되면 페록시다아제에 의하여 과산화수소가 분해될 때 발생하는 발생기 산소는 발색반응을 일으키고 흡착지 위에 존재하는 단백질은 띠 모양으로 나타나게 된다.

참고 자료

없음