Cell Lysis & Protein Quantification
- 최초 등록일
- 2013.03.15
- 최종 저작일
- 2011.04
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목차
1. Object
2. Introduction
3. Material and Apparatus
4. Method
5. Results
6. Discussion
7. Reference
본문내용
Bradford assay를 통해 sample의 protein을 정량하고 Sample buffer(5x)를 넣어 -20˚C에 보관한다.
Introduction
[Cell Lysis]
세포를 용해시켜 세포 내 물질(Lysate)을 얻어내는 실험으로 세포 안에 있는 protein, RNA, DNA등을 얻을 수 있다. 대부분의 세포에서, 약간의 삼투압 조절로도 lysis를 일으키기에 충분하다. solution의 ion strength를 낮추면 cell이 팽창하고 내용물이 분출된다.
Cell Lysis 방법들은 필요와 용도에 따라 다양한 방법들이 존재하며, 목적에 따라 맞는 Lysis buffer와 method를 선택하여 실험해야 한다.
<중 략>
첨가한 protein 양이 증가 할수록 푸른색에 가까워진다는 것을 알 수 있었다.
R2 0.99에 가깝고, curve의 형태가 직선형에 가까울수록 신뢰도가 높아진다고 하였는데 측정결과 직선에 가까운 것으로 보아 신뢰할 만하다고 할 수 있다.
준비한 Sample의 spectrophotometer로 측정
왼쪽부터 pcDNA, FL, 580, 410에 dye를 처리한 것.
모든 푸른색으로 변한 것으로 보아 상당량의 protein이 첨가 되었을 것으로 예상된다. 다음은 측정 결과이다
<중 략>
Kjedahl법은 단백질 또는 질소를 포함하는 유기물의 총 질소량을 정량하는데 널리 이용되는 방법이다. 단백질을 CuSO4와 같은 촉매의 존재 하에 진한 황산과 오랫동안 끓이면 질소는 모두 (NH4)2SO4가 된다. 이 혼합물의 일정량에 과량의 NaOH를 넣고 증류하여 이 때 발생하는 암모니아를 H3BO3용액에 흡수시킨 후 표준 산 용액으로 적정하여 질소의 양을 측정한다. 단백질은 평균하여 16%의 질소를 포함하고 있다. 1mg의 질소양은 6.25mg의단백질을 의미한다
참고 자료
http://bbwiki.tamu.edu/index.php?title=Bradford_assay
한국생화학회, 1997, 실험생화학, 53p~72p and 203p, 3rd edition, 탐구당, 서울
단백질 실험, 노트 강전아인 저 | 김승호 역 | 월드사이언스 | 2006.04.30.
생명과학 실험서, 권혁빈, 권세련, 권준영, 권혁추, 김경진 저| 라이프사이언스 | 2011.09.01
