FISH(fluorescence in situ hybridization),SISH(silver in situ hybridization)

소개글

FISH(fluorescence in situ hybridization),SISH(silver in situ hybridization)

목차

Ⅰ. FISH(fluorescence in situ hybridization)
1. 특징
2. 목적
3. 필요한것
4. 과정
5. 임상적 응용

Ⅱ. SISH(silver in situ hybridization)

본문내용

∎특정 DNA 염기서열(DNA sequence)의 존재유무를 규명하기 위하여 세포배양이나 DNA의 추출과정을 거치지 않고 염색체나 핵의 형태를 그대로 유지한 채 세포를 슬라이드에 도말하고 여기에 표적유전자의 특정 염기서열과 상보적인 DNA에 형광물질을 붙인 여러 종류의 소식자(probe)를 반응시켜 표적유전자의 유무와 위치를 확인함으로써 염색체 또는 유전자의 변이를 형광현미경으로 관찰하는 방법

∎염색체에 소식자를 부착시키는 검사과정을 교잡반응(hybridization)이라 부르고, 염색체에 부착되는 DNA 소식자는 자외선에 노출될 때 형광을 내면서 대응하는 DNA염기서열의 유무 및 위치를 보여준다.

∎특징
검사시약이 고가이고, 검사하는 소식자에 대한 결과만 알 수 있으나, 정량적 분석가능, 형태학적 관찰과 함께 판단할 수 있으며 검사소요시간 단축, 간기 세포의 분석이 가능

∎목적
• 특정 DNA의 존재 여부를 확인하고
• 세포내에서 혹은 염색체 상에서 이러한 특정 DNA의 위치를 결정짓고
• 전통적 검사법(G-banding)으로 관찰된 염색체 이상을 보다 정확하게 확인하고
• 현미경하에서 잘 관찰되지 않는 잠재 염색체이상 혹은 미세한 염색체 이상을 검출하는 것

< 중 략 >

●SISH(silver in situ hybridization)●
FISH가 형광현미경상에서 특정 유전자 존재유무를 관찰한다면, SISH는 광학현미경상에서 ?특정 유전자 서열의 존재 및 정상 유무를 시각적으로 관찰하는 기술
시간이 경과하면 형광이 사라지는 단점을 보완한 SISH (Silver이용)
탐침자에 DNP(Dinitrophenol)를 표지하고 DNP에 대응하는 1차 항체 Rabbit Anti-DNP와 반응 후 2차항체 Anti- Rabbit HRP와 반응시킨다. 2차 항체의 HRP는 Hydrogen Peroxide를 물과 산소로 분해하고 산소는 Sliver Acetate의 Sliver와 반응 비용해성 은침전물을 형성한다. Hydroquinone은 Sliver Acetate를 Acetic Acid로 환원시킨다.

참고 자료

없음