[서강대학교 현대생물학 실험레포트] Diagnosis Norovirus

소개글

Norovirus진단에 대한 서강대학교 현대생물학 실험레포트입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Discussion

본문내용

이번 실험은 diagnosis of Norovirus(genus ; Norovirus, family ; Caliciviridae) 로 viru s의 유무를 직접 실험을 통해서 확인하는 것이었다. 최초의 Norovirus는 미국 Ohio주의 Norwalk 지방에서 발생한 식중독에서 처음으로 원인체가 발견이 되면서 지역의 이름을 따서 불리고 있는 것으로 이름도 Norovirus와 함께 Norwalk virus라고도 불리는데 이것은 크기가 매우 작은 (27∼40nm) RNA virus로 겨울철 설사질환의 주원인 병원체이며 우리나라에서 발생하는 수인성 식품 매개질환 중 가장 흔하다. 또한 항생제로는 치료되지 않으며 체외에서는 생장할 수 없는 특징이 있다.

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우선 실내 온도를 15∼25℃로 설정한 상태에서 실험을 행하며 사용하는 buffer또한 15∼25℃의 상태를 유지하며 RNA관련 실험은 모두 poly-glove를 끼고 진행하며 오염이 의심 된다면 새 것으로 교체한다. 본 실험에서는 안전상의 문제로 viral RNA가 미리 extraction된 상태에서 진행하였으므로 viral RNA extraction과정을 생략하였으나 그 과정에 대해 소개하면 우선 lysis step으로 carrie-RNA-buffer-AVE 5.6㎕/buffer AVL mix 560㎕를 따서 1.5ml e-tube에 넣고 virus suspension 140㎕를 넣고 15초 동안 vortexing한다.

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사용한 primer는 random primer로 염기서열이 일정하지 않지만 길이가 고정된(9mer) primer이다. 이런 primer를 넣고 반응시키면 모든 RNA(mRNA, tRNA, rRNA)가 cDNA로 합성되는데, 즉 cDNA pool이 만들어지는 것이다. PCR에 쓰이는 Taq polymerase는 DN A-dependent DNA polymerase로 RNA로부터 직접 증폭할 수 없으므로 RNA를 template로 할 경우 이 cDNA를 합성한 후에 PCR이 가능한 것이다.

참고 자료

Virology, John Carter & Venetia, WILEY, 2007, pp.32-36 pp.97-98
Fundamental Molecular Biology, Lizabeth A.Allison, Worldscience, 2009, pp.251-252