실험4.Ligation&형질전환

소개글

열심히 쓴 자료입니다^^*

목차

1. 실험 날짜: 2012년 9월 26일 수요일
2. 실험 장소: 자연관 231호
3. 서론
4. 실험목적
5. 실험재료
6. 실험방법
7. 실험결과
8. 고찰과 의의
9. 참고문헌

본문내용

1. 실험 날짜: 2012년 9월 26일 수요일
2. 실험 장소: 자연관 231호
3. 서론
Ligation은 문자 그대로 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다. RNA ligase는 특수한 목적이 아닌 경우 잘 사용하지 않는다. 유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 유래한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고, E. coli ligase는 NAD+를 필요로 한다. 이들 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다.

<중 략>

7. 실험결과

왼쪽에서부터 순서대로 T-vecto, pGreen TIR, size marker이다. 맨 처음 사진에서 알 수 있듯이 반대편 검정색이 있는 쪽에 comb을 꽂아서 만들었다면 UV광 아래에서 뿐만 아니라 육안으로도 이동한 거리나 well에 용액이 들어간 것이 더 잘 보였을 텐데 하는 아쉬움이 있었다. 전기영동 결과 size marker는 여러 띠가 보였고, pGreen TIR(가운데)는 두 부분에서 띠가 생겼다. 마지막으로 T-vecto는 하나의 띠가 생겼는데, 조교선생님의 말씀으로는 T-vecto는 평소 두 개의 띠가 생기는데 다른 하나의 띠는 분자량이 너무 작아서 아가로스 겔 밖으로 나간 것 같다고 하셨다. 둘 다 (pGreen TIR, T-vecto) size marker와 비교하지 못해서 분자량이 어느 정도인지는 알 수 없었지만 pGreen TIR을 대략 얘기하자면 밑에서 진한 띠가 생기고 위에 띠는 비교적 얇았다. 그리고 T-vecto는 선명하게 pGreen TIR 의위의 띠가 생긴 부분에 정확하게 옆에 생겼다.

참고 자료

Brock의 미생물학 12판. 오 계 헌 역. 바이오사이언스.