유전자 재조합

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Ⅰ. Introduction

원심분리는 입자의 침전과 분리를 위하여 하게되는데 원심분리의 방법으로는 속도 침강 원심분리와 밀도기울기 원심분리 이렇게 두 가지가 있다.

『1. 속도 침강 원심분리
일반적으로 실험에 사용하는 방법으로 이번 실험에서도 사용될 방법이다. 먼저 시료를 원심분리관에 넣고 회전자에 장착한 후, 정해진 시간 동안 회전시키면 된다. 시료는 상등액과 침전물의 두 층으로 나뉘어지고, 상등액은 경사에 의하여 분리된다. 같은 속도로 오랜 시간 원심분리를 하면 무거운 입자가 먼저 침전하고 가벼운 입자는 나중에 침전한다. 또한 단계적으로 회전속도를 증가시키면 무거운 입자에서 가벼운 입자까지 따로따로 분리 침전시키는 것이 가능하다.

<중 략>

상대적으로 길기 때문에 보다 효과적으로 ligation 반응이 이뤄진다. 일반적으로 실제 유전자 재조합 실험에서는 PCR을 이용하여 운반체(vector)에 삽입될 DNA를 얻는 경우가 많다. 이 때 PCR에 사용되는 Taq DNA polymerase는 증폭시킨 DNA의 3’말단에 A를 하나 더 붙이면서 DNA를 증폭시킨다. 이렇게 만들어진 삽입 DNA(insert DNA)는 3’말단에 A가 있으므로 5’말단에 T가 붙어있는 T-vector에 ligation 시키면 보다 효율적으로 재조합 DNA를 얻을 수 있다.

참고 자료

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http://blog.naver.com/ltm430?Redirect=Log&logNo=110097856355
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