Elution of DNA
- 최초 등록일
- 2012.11.27
- 최종 저작일
- 2011.05
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소개글
Elution of DNA 레포트
목차
Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials
Ⅲ. Methods
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion
Ⅵ. Reference
본문내용
PCR이란 무엇인가?
PCR(polymer chain reaction)은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA molecule의 어느 부분이든지 그 border sequence만 알면 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing, extension의 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다. 기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소들에는 DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다.
<중 략>
DNA 분리 방법과 그 원리
1. Low melting temperature agarose method
agarose 중에서 저온에서도 녹는 agarose를 사용한다. agarose를 저온에서 녹여 용액에 녹은 DNA를 분리해 내는 방법이다.
<중 략>
이번 실험은 PCR product로 인해 얻은 DNA band를 통해서 순수한 DNA만을 얻기 위해서 elution을 하였다.
먼저 PCR로 증폭시킨 뒤 보관해두었던 DNA를 회수하는데, gel 조각을 e-tube에 넣은 뒤 간접적으로 무게를 측정한다. 다음으로는 gel 100㎎당 300㎕의 비율로 3 volume 의 GB(gel buffer)를 넣어준다.
만약 젤이 녹지 않는다면 젤 농도가 높아서 그럴 수 있다. 일루션 할 때는 젤을 확실하게 녹이는 것이 중요하다.
GB에는 NaI 혹은 NaClO, 그리고 6M의 chaotropic salt성분이 들어있는데, 이것의 역할은 gel을 녹이고 DNA와 glass fiber matrix와의 흡착을 돕는 것이다.
참고 자료
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_11.php
http://www.genehunters.co.kr/Training/01_5.htm
homepage.smc.edu/hgp/tools.htm