cDNA synthesis & PCR

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cDNA synthesis & PCR 실험레포트

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cDNA란?

초기에 많은 연구자들은 게놈에서 전사된 1차 산물인 RNA의 모든 종류를 모아 유전자의 종류나 유전자수를 파악해 왔다. 1차 산물인 RNA는 단일나선으로 불안정하며 또한 수명이 짧기 때문에 연구자가 시험관내에서 취급하기가 쉽지 않다. 그러나 RNA는 인위적으로 이중나선인 DNA로 전환시킬 수 있다. 이렇게 만들어진 것을 ‘cDNA’(copy 또는 complementary DNA)라고 부른다. 따라서 cDNA의 개수로부터 게놈의 유전자 개수를 알 수 있는 것이다. 물론 하나의 cDNA 자체가 바로 하나의 유전자를 의미하지는 않는다.
유전자를 찾는 더 확실한 방법은 cDNA를 얻어 게놈지도 상에서 해당하는 부분을 역추적하는 작업이다. cDNA란 mRNA로부터 거꾸로 얻어낸 DNA 가닥으로 유전자에서 실제 엑손부분에 해당하기 때문에 어느 부분이 유전자인지 확실히 알 수 있다.

<중 략>

이 기술은 변성온도에서도 견딜 수 있는 온천 세균인 Themus aquaticus에서 추출한 DNA 중합효소 때문에 가능하다. 따라서 복제주기 이후에도 반응 혼합물에 새로운 요소들을 추가로 넣어 줄 필요가 없어 주기는 PCR 기계 속에서 계속 진행될 수가 있다(PCR기계란 단지 반응물을 둘러싸고 있는 물의 온도를 정확하게 그리고 빠르게 변화시킬 수 있는 수조에 불과한 것이다). 어떤 기계는 96개의 시료를 동시에 증폭시킬 수도 있다.
PCR은 미세위성 DNA(microsatellite DNA)를 증폭시켜 DNA 지문을 얻는데 사용되고 있다. 미세위성 DNA는 유전체에 퍼져 있는 OADN 짧은 염기의 반복된 DNA이다. 예를 들면, 20개에서 60개 정도의 시토신-아데닌 반복이 진핵생물에서 오류에 의해 사람마다 좌위에서의 이 반복 수의 변이는 굉장히 많다. 그러나 VNTR좌위와 달리 이들 좌위 중 하나는 제한 효소 PCR 후 전기영동으로 그 결과를 바로 관찰할 수 있다. 단지 필요한 것은 어떤 미세위성을 둘러싸는 프라이머의 염기서열 뿐이다. PCR은 분자유전학 실험실에서 법의학 목적이나 연구목적으로 관심있는 DNA의 빠른 즈폭을 위해 일상적으로 사용되는 기술이다.

참고 자료

http://chanjae.net/32 -cdna란
http://cafe.naver.com/clontech.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=16&
http://agelf.blog.me/140016400157 - cdna 합성.