SDS-PAGE

소개글

실험레포트

목차

I. Title
II. Purpose
III. Principle
IV. Materials
V. Methods
VII. Result
VIII. Discussion
IX. Reference

본문내용

I. Title : SDS PAGE Gel 제조 & Loading & Coomassie Brilliant Blue Staining

II. Purpose
단백질을 SDS, ura 또는 2-mercapto ethanol과 같은 환원제로 용해시킨 후, SDS로 (-) 전하를 띄게 한 후 size별로 분리하고자 한다.

III. Principle
단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 검출하기 위해서 전기영동을 이용하여 크기 별로 분리한다. 이 과정에서 단백질을 순수하게 크기별로 분리해 내기 위해서, 단백질의 단위 질량당 전하량과 3차원적 구조를 모두 같게 해줘야 한다. SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)의 경우에는 SDS를 이용하여 단백질이 모두 단위 질량당 같은 음전하를 띠게 하여, 각각의 단백질 간의 전하 차이를 제거하고, 단백질의 2차원적, 3차원적 구조를 깨뜨려서 모양의 차이로 인한 이동 속도의 변화를 없게 해준다. 따라서 SDS-PAGE를 하면 단백질은 크기에 따라 음극으로부터 양극으로 이동하게 되는데 작은 크기의 단백질이 큰 단백질보다 빠른 속도로 이동하여 단백질이 크기에 따라 분리된다. gel을 Coomassie brilliant blue로 염색하여 전기영동으로 분리된 단백질 band를 확인 가능하다.

<중 략>

- 결과에 대한 분석
sample로 Protein Mixture와 Flow through까지 포함한 이유는, 이들을 비교해서 PC에는 있고 F.T에는 나타나지 않는 protein을 알아내기 위해서였다. (protein mixture는 AP가 존재하는 positive control이고, flow through는 AP가 존재하지 않는 negative control) 그런데 실험 결과를 보면 FT는 거의 band가 보이지 않을 정도로 희미하고 50-1 sample은 아예 band를 찾아볼 수 없다. 이러한 결과의 원인은 sample자체에 문제가 있거나 단백질을 gel에 loading하는 과정에서 문제가 있었거나 제대로 staining되지 않아서라고 짐작된다. 첫 번째 가능성인 sample 자체의 문제는 지난 실험에서 단백질 정량을 해봤기 때문에 sample자체의 단백질이 없을 리가 없다. 아마 sample loading과정이나 staining 과정에서 문제가 있었던 것으로 짐작된다.

참고 자료

http://blog.naver.com/shung78?Redirect=Log&logNo=130031545514

http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1116&docId=59121736&qb=U0RTLVBBR0UgZ2x5Y2luZSwgY2w=&enc=utf8§ion=kin&rank=2&search_sort=0&spq=0&pid=gGTyZ35Y7tGsstAz6Elssc--323469&sid=T4Wn53OchU8AAB3yBeQ